功能化环氧树脂共固定化TLL与CALB脂肪酶：提升稳定性、可重用性及生物催化效率的创新策略

本综述系统阐述了将Thermomyces lanuginosus脂肪酶（TLL）与Candida antarctica脂肪酶B（CALB）通过功能化环氧树脂（经支化聚乙烯亚胺（BPEI）和戊二醛修饰）共固定化的策略。研究通过Taguchi L9法优化条件（12 h、pH 9、100 mM缓冲液、6 mg/g酶载量），显著提升了固定化效率、热稳定性（50–80?°C半衰期延长）、pH/有机溶剂耐受性及180天储存稳定性（>80%活性），为工业生物催化剂设计提供新范式。

　　

Materials（材料）

来自Thermomyces lanuginosus的脂肪酶（TLL）和Candida Antarctica的脂肪酶B（CALB）购自Sigma-Aldrich巴西有限公司（Cotia, SP, BR）。II级戊二醛溶液、对硝基苯丁酸酯（p-NPB）和Triton X-100购自Sigma-Aldrich（美国密苏里州圣路易斯市）。所有其他化学试剂均为分析级，来自Synth（巴西圣保罗）和Vetec（巴西圣保罗）。支化聚乙烯亚胺（BPEI）（分子量10,000）购自Sigma-Aldrich。

Process optimization using the Taguchi method（采用Taguchi方法优化流程）

自创立以来，Taguchi方法一直用于优化工艺。本研究利用该工具评估所考察酶的固定化参数。该方法的应用使得能够以最少的实验次数发现酶固定化的最佳条件。在此方法中，每个因素的三个水平相互评估，从而实现固定化产率的最大化。

因此，该优化过程确定了共固定化脂肪酶CALB和TLL到功能化环氧树脂中的理想条件：反应时间12小时、pH 9、100 mM缓冲液以及6 mg/g支撑物的酶载量。这些条件显著提高了固定化参数，反映了酶固定效率的显著提升。

Conclusions（结论）

酶共固定化过程需要仔细优化以平衡不同的催化组分，从而确保所得生物催化剂的稳定性。本研究证明，在BPEI功能化环氧树脂（RE）中共固定化脂肪酶CALB和TLL的优化过程是高效的。在评估的参数和水平范围内，确定的最佳条件为：固定化时间12小时、缓冲液浓度100 mM、pH 9以及酶载量6 mg/g支撑物。这些条件共同作用，显著增强了生物催化剂的性能和操作耐久性。