荷叶离褶伞多糖LP1–1的结构解析及其通过TLR2/4介导巨噬细胞活化的机制研究

本文系统解析了Lyophyllum decastes多糖LP1–1的一级结构（重复单元为→3)-β-D-Glcp-(1→, 3,6)-β-D-Galp-(1→），并首次揭示其通过Toll样受体（TLR2/4）激活IκBα和MAPK信号通路，显著增强巨噬细胞吞噬功能及炎症因子（IL-6、TNF-α、NO）分泌，为真菌多糖的免疫调节机制研究和功能性食品开发提供重要理论依据。

　　

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Materials and chemicals

荷叶离褶伞（Lyophyllum decastes (Fr.) Singer）子实体购自广东电白中贸生物科技有限公司。标准单糖和普鲁兰标准品购自日本昭和电工（东京）。DEAE-52纤维素层析柱和Sephadex G-100层析柱购自北京博奥拓达科技有限公司。刚果红购自天津大茂化学试剂厂。DMEM培养基、胎牛血清（FBS）和青霉素-链霉素溶液购自美国Gibco公司。小鼠巨噬细胞系RAW264.7购自中国科学院细胞库。Toll样受体2（TLR2）和TLR4抗体购自美国Santa Cruz公司。所有其他化学品均为分析纯。

Isolation of Lyophyllum decastes polysaccharides and analysis of their composition

LP1–1的提取纯化流程如图1A所示。通过热水提取、乙醇沉淀、脱蛋白和冻干等标准程序，从荷叶离褶伞中获得粗多糖组分（CAP，6.56 g，得率6.56%），多糖含量为73.42%（总得率4.06%）。将CAP在DEAE-52阴离子交换层析柱上纯化，使用0-0.3 M NaCl梯度洗脱后观察到两个显著吸收峰，分别标记为LP1和LP2。其中LP1经Sephadex G-100凝胶层析进一步纯化，得到主要组分LP1–1（图1B）。通过高效凝胶渗透色谱（HPGPC）分析显示LP1–1为单一对称峰（图1C），表明其为均一多糖，分子量为17.4 kDa。

Conclusion

本研究从荷叶离褶伞子实体中分离纯化得到多糖LP1–1，其分子量为17.4 kDa。LP1–1具有重复单元→3)-β-D-Gl_cp-(1→, 3,6)-β-D-Gal_p-(1→，末端α-D-Gl_cp-(1→4)-α-D-Gl_cp-(1→通过→3,6)-β-D-Gal_p-(1→的O-6位连接至重复单元。本研究首次证明荷叶离褶伞多糖（LP1–1）可通过TLR2和TLR4受体激活IκBα和MAPK信号通路，从而发挥免疫刺激作用。