循环肿瘤DNA在卵巢癌诊断中的应用：一项系统评价

《International Journal of Gynecological Cancer》：Circulating Tumor DNA in the Diagnosis of Ovarian Cancer: A Systematic Review

卵巢癌早期诊断困难，本研究系统回顾19项研究，评估血浆/血清中循环肿瘤DNA（ctDNA）检测肿瘤特异性基因甲基化及拷贝数变异的敏感性和特异性（40.6%-94.7%，56%-100%），显示ctDNA在早期诊断中优于CA125（部分研究灵敏度达94.7%）。

　　卵巢癌是全球女性中最常见的癌症之一，其预后较差，是妇科癌症中死亡率最高的类型。由于疾病在晚期才被诊断，以及缺乏有效的早期筛查手段，卵巢癌的发病率和死亡率居高不下。目前，临床常用的诊断标志物是CA125，它是一种血液中的肿瘤相关蛋白，能够帮助医生评估卵巢癌的存在与否。然而，CA125在早期阶段的敏感性较低，仅在约50%的早期病例中升高，且在某些非恶性疾病中也可能升高，导致其特异性不足。因此，寻找更准确、非侵入性的诊断标志物成为当前研究的重要方向。

近年来，循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA, ctDNA）作为一种新型的非侵入性生物标志物，展现出巨大的潜力。ctDNA是指从肿瘤细胞释放到血液中的DNA片段，其携带了肿瘤的特异性遗传和表观遗传改变，如基因突变、DNA甲基化模式和拷贝数变异等。这种标志物不仅能够提供关于肿瘤的存在和类型的信息，还可能用于监测肿瘤进展、评估治疗反应以及预测耐药性。然而，尽管ctDNA在多种实体瘤中的应用已经较为成熟，其在卵巢癌中的研究仍处于探索阶段，且存在一定的局限性。

本研究通过系统综述的方法，评估了ctDNA在卵巢癌诊断中的准确性和临床价值。研究团队对PubMed、Web of Science和EBSCO等数据库进行了全面的文献检索，时间截止到2024年4月。最终，共有19项研究被纳入分析，这些研究涵盖了多种检测方法，包括基于聚合酶链反应（PCR）的甲基化检测（占73.7%）和基于测序的方法（占21%），如全基因组测序（WGS）和下一代测序（NGS）。这些研究主要关注ctDNA在血液中的检测能力，包括其在区分卵巢癌与健康人群或良性卵巢病变中的表现。

研究结果显示，ctDNA的诊断准确率存在较大差异。敏感性范围从40.6%到94.7%，特异性从56%到100%不等。然而，总体而言，ctDNA在早期卵巢癌的检测中表现出优于CA125的能力。例如，在一项研究中，ctDNA检测方法在早期阶段（FIGO I-II）的敏感性达到87.1%，而CA125的敏感性仅为53.8%。此外，ctDNA在区分卵巢癌与良性病变方面也显示出较高的特异性，尤其是在使用多基因检测方法时，其准确性进一步提高。

ctDNA的检测方法主要包括甲基化分析和拷贝数变异分析。甲基化分析主要关注肿瘤抑制基因启动子区域的甲基化状态，如SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5、SOX1、PAX1、LMX1A等。这些基因的甲基化状态在卵巢癌中更为常见，且能够作为早期诊断的潜在指标。在一项研究中，通过分析这些基因的甲基化状态，研究人员实现了73%的敏感性和75%的特异性。而在另一项研究中，利用qMSP（定量甲基化特异性PCR）技术检测多个基因的甲基化状态，如RASSF1A、DAPK1、SOX1、HOXA9、HIC1、SPARC和SFRP1，实现了高达88.8%的敏感性和100%的特异性。这些结果表明，通过多基因的甲基化分析，可以显著提高ctDNA在卵巢癌诊断中的准确率。

拷贝数变异分析则关注肿瘤DNA在血液中的拷贝数变化，如染色体不稳定性（chromosomal instability）和拷贝数变异（copy number variation, CNV）。其中，一项研究利用低覆盖度的全基因组测序（WGS）技术检测了染色体不稳定性，结果表明在区分卵巢癌患者与健康人群时，敏感性达到91%，特异性达到95%。另一项研究通过分析cfDNA（细胞游离DNA）的拷贝数变异，检测到高分级浆液性卵巢癌（HGSOC）的特异性达到93.8%，而敏感性为40.6%。这些结果表明，拷贝数变异分析在某些情况下也能够有效检测卵巢癌，但其在早期诊断中的表现仍需进一步优化。

此外，研究还比较了ctDNA与CA125在诊断卵巢癌中的表现。在多个研究中，ctDNA的诊断准确率显著高于CA125。例如，在一项研究中，ctDNA检测方法在早期阶段的敏感性达到85.3%，而CA125的敏感性仅为56.1%。另一项研究中，ctDNA的AUC（曲线下面积）达到0.96，而CA125的AUC仅为0.90。这些结果表明，ctDNA在卵巢癌的早期诊断中具有更高的准确性和可靠性。

然而，ctDNA检测方法也存在一定的局限性。首先，由于卵巢癌的高度异质性，不同亚型的卵巢癌在基因表达和甲基化模式上存在较大差异，这使得单一基因检测方法的敏感性和特异性受到限制。其次，ctDNA的浓度在血液中较低，尤其是在早期疾病阶段，这可能导致检测结果的敏感性不足，从而增加假阴性风险。此外，ctDNA的检测方法需要较高的技术和设备支持，成本较高，这在某些资源有限的地区可能成为推广的障碍。

为了克服这些局限性，研究团队建议采用多基因检测方法，并结合先进的测序技术，如下一代测序（NGS）和全基因组测序（WGS）。这些技术能够同时检测多个基因的甲基化状态和拷贝数变异，从而提高诊断的准确性和全面性。此外，结合临床影像学和病理学检查，可以进一步提高ctDNA检测的临床价值。

总体而言，本研究强调了ctDNA在卵巢癌诊断中的潜力，尤其是在早期检测和提高诊断准确性方面。然而，由于研究方法和样本来源的多样性，目前尚无法进行大规模的荟萃分析，以提供更精确的诊断数据。因此，未来的研究需要进一步标准化检测方法，并扩大样本量，以验证ctDNA在卵巢癌诊断中的临床应用价值。同时，开发更高效的检测技术和降低成本，也将有助于ctDNA在临床实践中的广泛应用。