5,7-二甲氧基黄酮通过调控肠道Akkermansia muciniphila与肝脏CD8+T细胞浸润抑制肝细胞癌进展的机制研究

《Chinese Medicine》：5,7-dimethoxyflavone inhibits hepatocellular carcinoma progression via increasing intestinal Akkermansia muciniphila and hepatic CD8+ T cell infiltration

本研究针对肝细胞癌（HCC）中肠道菌群失调与CD8+T细胞免疫功能受损的关键问题，探讨了天然黄酮类化合物5,7-二甲氧基黄酮（DMF）的抗肿瘤机制。研究人员通过DEN/CCl4诱导的小鼠HCC模型，结合16S rRNA测序、微生物移植、代谢组学和转录组分析等技术，发现DMF可显著上调肠道Akkermansia muciniphila（A. muciniphila）丰度，修复肠屏障功能，并通过抑制NF-κB/CCL2通路增强CD8+T细胞抗肿瘤免疫。该研究为HCC的免疫微环境调控提供了新的治疗策略，发表于《Chinese Medicine》。

　　

肝细胞癌（HCC）是全球范围内发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤，其发生发展常伴随肝脏纤维化、肝硬化以及肠道菌群的严重失调。尽管免疫检查点抑制剂（ICIs）在HCC治疗中取得了一定突破，但患者应答率低、肿瘤免疫微环境抑制仍是临床面临的严峻挑战。肠道与肝脏通过“肠-肝轴”密切相连，肠道菌群紊乱会破坏肠屏障，导致细菌及其代谢产物进入肝脏，加剧炎症反应与肿瘤进展。因此，寻找能够同时调节肠道菌群和增强抗肿瘤免疫的有效药物，成为当前HCC研究的热点。

5,7-二甲氧基黄酮（DMF）是来自泰国姜黄（Kaempferia parviflora）的一种天然黄酮类化合物，既往研究显示其具有抗炎、抗氧化及抗肿瘤潜力，但其在HCC中的作用及机制尚不明确。为此，研究人员在《Chinese Medicine》上发表论文，系统探讨了DMF是否通过调控“肠道菌群—免疫微环境”轴抑制HCC进展。

为开展本研究，作者构建了DEN（二乙基亚硝胺）/CCl₄（四氯化碳）诱导的小鼠HCC模型，并分别给予低、高剂量DMF干预；通过磁共振成像（MRI）、组织病理染色、血清生化指标及ELISA评估肿瘤进展与肝功能；利用16S rRNA测序、微生物移植、粪便及血清代谢组学（包括非靶向代谢组与靶向代谢组QMT1000）分析肠道菌群与代谢物变化；采用转录组测序、分子对接、实时定量PCR（RT-PCR）及Western blot（WB）探究DMF对HCC细胞的分子作用靶点；通过流式细胞术和免疫荧光染色检测肿瘤组织中CD8⁺T细胞的浸润与功能状态。

DMF抑制小鼠HCC进展

通过体内实验发现，DMF处理可显著减少肝脏肿瘤结节数量、最大肿瘤直径及肝体比，降低血清ALT（丙氨酸转氨酶）、AST（天门冬氨酸转氨酶）和AFP（甲胎蛋白）水平，改善肝功能。组织病理及免疫组化（IHC）结果显示，DMF下调了肿瘤标志物AFP和增殖指标Ki67的表达，表明DMF有效抑制了HCC的发展。

DMF抗肿瘤作用部分依赖于肠道菌群，特别是A. muciniphila

抗生素清除肠道菌群后，DMF的抗肿瘤效果被削弱，说明其作用依赖肠道微生物。16S rRNA测序显示，DMF能恢复HCC小鼠肠道菌群的α多样性与β多样性，显著提升Akkermansia muciniphila等有益菌的丰度。体外培养实验进一步证实DMF可直接促进A. muciniphila生长。补充活菌A. muciniphila可模拟DMF的效果，显著减轻肝损伤、降低肿瘤负荷，其机制与增强肠道屏障蛋白Occludin表达、调节谷胱甘肽（抗氧化）和11,12-二羟基二十碳三烯酸（11,12-DIHETE，促炎）代谢相关。

DMF增强CD8⁺T细胞介导的抗肿瘤免疫

血清非靶向代谢组学提示DMF吸收入血后还存在其他抗肿瘤机制。流式细胞与免疫荧光结果显示，DMF处理增加了肿瘤组织中CD8⁺T细胞的浸润，提升其干扰素-γ（IFN-γ）表达，降低免疫检查点PD-1（程序性死亡蛋白1）水平，表明DMF可改善CD8⁺T细胞的功能衰竭状态。

DMF通过抑制NF-κB/CCL2通路增强CD8⁺T细胞浸润

在Hepa1-6细胞中，DMF以剂量依赖方式抑制细胞活力。转录组分析发现，DMF下调了822个基因，其中CCL2（C-C motif趋化因子配体2）是关键节点。分子对接显示DMF与NF-κB p65结合亲和力最高；Western blot验证DMF抑制NF-κB p65磷酸化（p-p65），进而降低CCL2表达，而ERK1/2和STAT3通路未受影响。使用NF-κB激动剂（Compound 32）可逆转DMF对CCL2的抑制作用，说明DMF通过阻断NF-κB/CCL2轴调控肿瘤细胞与CD8⁺T细胞的交互作用。

本研究系统阐明了DMF通过上调肠道A. muciniphila、修复肠屏障、抑制肝脏NF-κB/CCL2信号通路，进而增强CD8⁺T细胞抗肿瘤免疫的多重机制，不仅深化了对黄酮类化合物免疫调节作用的理解，也为HCC的联合治疗提供了新思路。该研究提示，针对“肠道菌群—免疫微环境”轴的干预策略可能是提高HCC免疫治疗疗效的有效途径。