microRNA组预测类风湿关节炎患者动脉粥样硬化性心血管疾病进展与死亡风险的8年前瞻性研究

本前瞻性研究通过8年随访发现，在类风湿关节炎（RA）患者中，一组循环microRNA（hsa-miR-24、-146、-Let7a、-425、-451和-155-5p）可显著提升动脉粥样硬化性心血管疾病（ASCVD）进展和全因死亡的预测效能。该生物标志物组合有望弥补传统风险因素的不足，为RA患者心血管风险分层和个体化管理提供新方向。

　　

1 引言

类风湿关节炎（RA）是一种慢性自身免疫性疾病，不仅导致关节破坏和功能残疾，还显著增加动脉粥样硬化性心血管疾病（ASCVD）的风险。RA患者的ASCVD风险比普通人群高50%，传统危险因素无法完全解释这一风险升高。近年来，微小核糖核酸（microRNA, hsa-miR）作为基因表达的关键调控因子，在ASCVD病理生理过程中的作用日益受到关注。这些小型非编码RNA通过调控内皮功能、炎症反应和斑块稳定性参与动脉粥样硬化过程。前期研究发现，RA患者和急性心肌梗死患者中存在10种表达模式相似的hsa-miRs，提示它们可能在RA相关ASCVD中发挥重要作用。本研究在此基础之上，重点关注hsa-miR-24、-146a、-let-7a、-425、-451和-155-5p，旨在评估这些hsa-miR在预测RA患者ASCVD进展和死亡率方面的潜在价值。

2 材料与方法

2.1 研究设计与参与者

这项前瞻性队列研究最初纳入了235名RA患者，所有患者均符合1987年美国风湿病学会（ACR）分类标准，并辅以2010年ACR/EULAR标准以提高诊断特异性。排除标准包括年龄小于18岁或大于80岁、患有恶性肿瘤、慢性肾病、活动性感染、其他自身免疫性疾病或重大合并症。最终有148名患者完成了为期8年的随访。研究方案获得医院伦理委员会批准，所有参与者均签署知情同意书。

2.2 实验室测量

收集了传统心血管危险因素（吸烟、高血压、2型糖尿病（T2DM）和血脂异常）、ASCVD事件史和用药情况。临床指标包括体重指数（BMI）、血压、健康评估问卷（HAQ）指数和疾病活动度评分（DAS28-ESR）。实验室检测包括类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（ACPA）、血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）和纤维蛋白原。

2.3 研究终点

主要终点包括：①ASCVD进展：定义为随访期间出现新的颈动脉粥样硬化斑块和/或非致死性心血管事件（包括冠心病、卒中或外周动脉疾病）；②全因死亡率。

2.4 血浆microRNA表达

研究人员检测了基线期和随访期血浆中hsa-miR-24、-146、-Let7a、-425、-451和-155-5p的表达水平。使用miRCURY RNA Isolation Kit提取RNA，并通过qPCR进行定量。以hsa-miR-16-5p作为内参基因，采用ΔCt方法计算相对表达量。

2.5 统计分析

采用四种主要分析方法：①使用稀疏偏最小二乘判别分析（sPLS-DA）评估hsa-miR组合对研究终点的预测价值；②通过多变量逻辑回归分析单个hsa-miR的预测能力；③使用广义线性混合模型分析hsa-miR纵向变化与终点事件的关联；④通过线性混合模型识别影响hsa-miR表达的生物学因素。

3 结果

3.1 基线特征与随访情况

基线时患者中位年龄为57岁，64%为女性。随访8年后，中位年龄增至63岁，女性比例升至68%。血脂异常患病率显著增加（p=0.005），而高血压、T2DM和当前吸烟率保持稳定。疾病活动度和炎症指标显著改善：DAS28-ESR（p<0.001）、ESR（p=0.01）和CRP（p=0.003）均下降。生物制剂（包括JAK抑制剂）使用率显著增加（p<0.001），而传统合成改善病情抗风湿药（csDMARDs）、非甾体抗炎药（NSAIDs）和皮质类固醇使用减少。

3.2 ASCVD进展

39%的患者（n=58）出现ASCVD进展。颈动脉斑块患病率从基线时的39%增加到随访时的50%（p=0.047），非致死性ASCVD事件从8%增加到14%（p=0.09）。

3.3 死亡率与失访原因

35名患者死亡，死因包括感染（34%）、心血管疾病（31%）、肿瘤（20%）和其他原因（14%）。死亡患者年龄更大（p<0.001）、男性更多（p=0.02）、BMI更高（p=0.003）、高血压（p=0.001）和T2DM患病率更高（p=0.01），炎症标志物水平也更高。

3.4 hsa-miR组合预测ASCVD进展

sPLS-DA模型显示，基线hsa-miR水平可预测ASCVD进展，解释了43%的结局变异性。模型区分进展者与非进展者的能力显著（p=0.001），平均AUC为0.74-0.76。当排除hsa-miR后，模型预测性能下降，解释变异性减少至33%。

3.5 单个hsa-miR预测ASCVD进展

在总体队列中，单个hsa-miR基线表达与ASCVD进展无显著关联。但性别分层分析显示，在女性中，较低的hsa-miR-24（OR=0.48, p=0.02）、-146（OR=0.52, p=0.02）和-Let7a（OR=0.48, p=0.02）基线表达水平显著预测ASCVD进展。这些hsa-miR的加入提高了模型预测性能（C统计量增加，AIC降低）。在男性中未观察到显著关联。

3.6 hsa-miR纵向变化预测ASCVD进展

广义线性混合模型显示，hsa-miR-24（OR=0.29, p=0.01）、-146（OR=0.30, p=0.04）、-Let7a（OR=0.32, p=0.03）、-425（OR=0.23, p=0.02）和-155-5p（OR=0.27, p=0.03）表达水平降低与ASCVD进展风险减少相关。性别分层分析显示，所有5种hsa-miR在女性中均有预测价值，而在男性中仅-146和-Let7a有显著关联。

3.7 hsa-miR组合预测死亡率

sPLS-DA模型对全因死亡率表现出强大的区分能力（AUC=0.85-0.86, p=0.001），解释了42%的变异性。bootstrap验证显示平均错误率为0.10。当排除hsa-miR后，模型性能下降，解释变异性减少至37%。

3.8 hsa-miR表达的生物学决定因素

随访期间，hsa-miR-24、-146、-Let7a、-425和-155-5p表达水平升高（ΔCt降低），而hsa-miR-451表达降低（ΔCt增加）。线性混合模型识别出年龄和血脂异常影响hsa-miR-24和-146表达；疾病病程和高血压影响hsa-miR-Let7a；BMI和疾病病程影响hsa-miR-425；性别影响hsa-miR-451；疾病病程影响hsa-miR-155-5p。

4 讨论

这项为期8年的前瞻性研究证实，尽管RA治疗取得进展，但患者仍面临显著的ASCVD进展和死亡风险。研究发现一组hsa-miR（hsa-miR-24、-146、-Let7a、-425、-451和-155-5p）能够显著改善RA患者心血管风险预测和分层。这些hsa-miR通过调控氧化应激、内皮功能障碍、血管生成和斑块稳定性等过程参与动脉粥样硬化形成。

研究揭示了hsa-miR表达存在的性别差异，所有测试的hsa-miR在女性中均显示预测价值，而在男性中仅部分有显著关联。这种差异可能与激素影响、遗传和表观遗传因素有关。研究还发现年龄、疾病病程、性别和心血管代谢条件等因素会调节hsa-miR表达，表明这些生物标志物受到多种生理和病理状态的影响。

研究的局限性包括样本量相对较小、参与者均为欧洲白人、以及hsa-miR量化技术的固有变异性。需要在更大规模、更多样化的队列中进行验证，以确认这些发现的临床适用性。

结论

本研究证明，尽管生物制剂广泛应用改善了RA疾病控制，但患者仍然面临显著的ASCVD进展和死亡风险。研究发现的一组hsa-miR代表了有前景的生物标志物工具，能够改善RA患者的心血管风险预测。经过进一步验证，该hsa-miR组合可整合到临床实践中，实现更精确的风险分层和个性化治疗策略，最终减少ASCVD相关并发症并改善RA患者的长期预后。