泼尼松对生殖功能障碍女性子宫内膜免疫细胞的独特抑制作用

《American Journal of Reproductive Immunology》：Distinct Suppression of Prednisone on Endometrial Immune Cells in Women With Reproductive Failure

选择性抑制CD3?CD56+CD16? NK细胞和CD68+CD16? macrophages in reproductive failure women after prednisone treatment.

　　本研究探讨了糖皮质激素类药物泼尼松对患有生殖失败（包括反复着床失败和反复流产）女性子宫内膜免疫细胞的影响。研究结果表明，泼尼松在特定的免疫细胞亚群中表现出显著的抑制作用，而在其他免疫细胞中则没有明显变化。这提示我们，泼尼松并非对所有免疫细胞都具有普遍的抑制效果，而是具有选择性地作用于某些特定的细胞类型。该发现对于未来的临床应用和研究方向具有重要意义，尤其是在识别泼尼松治疗的适用人群方面。

子宫内膜免疫细胞在准备受精卵着床和维持妊娠的过程中发挥着关键作用。在着床窗口期（WOI）和早期妊娠阶段，子宫自然杀伤细胞（NK细胞）和巨噬细胞的活动显著增强。NK细胞通常分为两种亚型：CD56+CD16?和CD56+CD16+。前者具有调节功能，能够分泌多种生长因子和趋化因子，而后者则具有更强的细胞毒性。研究表明，在生殖失败的女性中，NK细胞数量明显增加，这可能与局部免疫环境失衡有关。同样，巨噬细胞、T细胞以及NK样T细胞的数量在这些人群中也有所变化，这些细胞的异常可能与妊娠失败密切相关。

泼尼松作为一种常用的免疫抑制剂，被广泛用于调节过度的免疫反应，以提高胚胎着床率并减少流产风险。然而，最近的一项大规模随机对照试验显示，泼尼松并未在反复着床失败的女性中显著提高活产率。这引发了关于泼尼松治疗有效性的争论。尽管如此，泼尼松在临床实践中仍被用于治疗生殖失败，但缺乏对其具体作用机制的深入理解。本研究通过采用多重免疫组化（m-IHC）技术，对泼尼松治疗前后子宫内膜中不同免疫细胞的密度和细胞间聚集情况进行了分析，从而揭示了泼尼松对特定细胞亚型的抑制作用。

研究招募了24名患有生殖失败的女性，其中部分患者具有较高的NK细胞比例。这些女性在排卵后的第7天接受了子宫内膜活检，并在随后的月经周期中接受了泼尼松治疗。治疗结束后，再次进行活检以评估免疫细胞的变化。研究结果显示，泼尼松显著降低了CD3?CD56+CD16? NK细胞和CD68+CD16?巨噬细胞的比例，同时也减少了它们的聚集程度。然而，CD3?CD56+CD16+ NK细胞、CD68+CD16+巨噬细胞、CD3+CD56? T细胞以及CD3+CD56+ NK-T细胞的数量和聚集情况并未发生显著变化。这一结果表明，泼尼松对免疫细胞的影响是选择性的，而非普遍性的。

研究还采用了系统的方法对细胞计数进行分析，以确保结果的准确性和可重复性。通过Mantra定量病理工作站和Inform软件，研究人员对不同免疫细胞的分布进行了详细的分类和计数。这一技术不仅提高了分析的精度，还减少了人为误差。此外，研究还评估了观察者之间的重复性和一致性，确保数据的可靠性。

值得注意的是，虽然泼尼松对CD3?CD56+CD16? NK细胞和CD68+CD16?巨噬细胞具有显著的抑制作用，但这些细胞在生殖失败中的具体功能仍需进一步研究。例如，CD3?CD56+CD16? NK细胞在正常情况下具有调节作用，有助于促进子宫内膜的血管生成，从而为胚胎着床创造有利条件。然而，其数量的增加可能与局部免疫反应的异常有关，进而影响妊娠成功率。泼尼松对这些细胞的抑制作用可能有助于恢复正常的免疫环境，但同时也可能影响其生理功能，因此需要谨慎使用。

同样，CD68+CD16?巨噬细胞在子宫内膜中也具有重要作用，特别是在促进血管生成、组织修复和抗炎反应方面。这些细胞通常表现出M2型巨噬细胞的特征，而M1型巨噬细胞则倾向于引发炎症反应。研究发现，泼尼松对CD68+CD16?巨噬细胞的抑制可能导致其功能受损，进而影响子宫内膜的准备过程。这可能解释了为何泼尼松在改善活产率和降低流产率方面效果有限。

此外，研究还探讨了不同免疫细胞之间的空间分布关系。通过分析细胞间的聚集程度，研究人员发现泼尼松治疗显著减少了CD3?CD56+CD16? NK细胞与CD68+CD16?巨噬细胞之间的聚集。这种空间分布的变化可能反映了细胞间相互作用的减少，而这些相互作用对于维持免疫耐受和促进胚胎着床至关重要。因此，泼尼松对细胞间相互作用的影响可能在一定程度上影响其治疗效果。

尽管研究结果提供了泼尼松对特定免疫细胞亚型的抑制作用的证据，但仍有诸多问题需要进一步探讨。例如，不同免疫细胞亚型对泼尼松的反应差异可能与其表面受体（如糖皮质激素受体GR）的表达水平有关。然而，目前尚不清楚这些细胞在不同病理状态下GR的表达情况。此外，研究并未探讨免疫细胞变化与体外受精-胚胎移植（IVF-ET）结果之间的关系，因此无法评估泼尼松对临床妊娠成功率的具体影响。

本研究的另一个重要发现是，泼尼松对NK细胞和巨噬细胞的抑制作用可能是通过不同的机制实现的。例如，CD3?CD56+CD16? NK细胞的减少可能与细胞数量的降低有关，而CD68+CD16?巨噬细胞的减少可能与细胞功能的改变有关。这些不同的反应模式提示我们，泼尼松的治疗效果可能因个体差异而有所不同，因此需要更精细的免疫细胞分型和更全面的临床评估。

总体而言，本研究为泼尼松在生殖失败中的应用提供了新的视角。尽管泼尼松能够显著减少某些免疫细胞亚型的数量和聚集，但其对其他细胞亚型的影响则不明显。这一选择性作用可能意味着泼尼松并非适用于所有生殖失败患者，而是更适用于那些具有特定免疫细胞异常的个体。因此，未来的临床研究需要更加精确地评估免疫细胞的状态，并据此制定个性化的治疗方案。

此外，本研究的局限性也值得提及。由于样本量较小，无法对反复着床失败和反复流产患者进行更细致的亚组分析。同时，研究仅通过空间分布来评估细胞间的相互作用，而未深入探讨这些相互作用的功能性影响。因此，未来的研究应结合细胞因子谱分析、信号通路研究以及功能实验，以更全面地理解泼尼松对子宫内膜免疫微环境的影响。

综上所述，泼尼松对子宫内膜免疫细胞的影响是复杂且具有选择性的。尽管其在某些细胞亚型中表现出显著的抑制作用，但在其他细胞中则无明显变化。这一发现对于优化泼尼松的使用策略和提高生殖失败患者的治疗效果具有重要的指导意义。未来的研究应进一步探索免疫细胞亚型的具体功能及其对泼尼松的反应机制，以便更精准地指导临床实践。