酵母补充对生长羔羊全混合日粮中微量矿物质瘤胃溶解度与生物利用度的调控效应

本刊推荐：本研究探讨酵母补充（YS）对饲喂全混合日粮（TMR）的生长羔羊血液、瘤胃液及肌肉中多种微量矿物质（TM）浓度的影响，揭示其通过调节瘤胃微生物活性及矿物质吸收通路，显著提高Mn、Cu、Se等元素的生物利用度（bioavailability），并改善组织间矿物质动态关联，为天然饲料添加剂的应用提供新依据。

　　

引言

近年来，全球对食品安全和公共健康的关注度日益提高，特别是在畜牧养殖中抗生素和化学添加剂的使用方面。这些添加剂存在潜在风险，包括化学残留物在动物产品中的积累以及抗生素耐药性病原体的发展。因此，国际社会越来越关注探索反刍动物抗生素饲料添加剂的天然替代品。其中，酵母补充（YS）因其对动物和人类福利的潜在益处而备受重视。酵母，尤其是酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），已被广泛研究其对小反刍动物营养利用和动物性能的积极影响。报告的益处包括提高干物质（DM）摄入量和体重增加、调节挥发性脂肪酸谱、稳定瘤胃pH值以及改善瘤胃微生物平衡。然而，一些研究也注意到酵母使用会降低或对生长速率和饲料转化效率没有影响。酵母培养物已被证明影响消化道中微量矿物质（TM）的吸收。例如，Jiang报告称，接受酵母培养的羔羊对钾（K）、铜（Cu）、铁（Fe）和锌（Zn）的保留率更高。其他研究表明，酵母补充可以提高血液血清、瘤胃、肝脏、肾脏和肌肉中Zn、Fe、Cu和钴（Co）的浓度，表明其有潜力提高TM的生物利用度和组织沉积。酵母富含硒（Se）；因此，本研究中的Se补充水平是根据国家研究委员会（NRC）对小反刍动物的建议（0.1–0.3 mg/kg DM）选择的，远低于最大耐受水平（MTL）2.00 mg/kg DM，并且远低于绵羊的毒性阈值（>5.00 mg/kg DM）。尽管有这些发现，酵母补充下瘤胃液、血液血清和肌肉中微量矿物质之间的关系仍不清楚。关于不同水平酵母如何影响生长羔羊中TM分布的数据有限，尤其是当饲喂由全混合日粮（TMR）组成的高纤维日粮时。这提出了一个重要问题：各种组织中TM浓度与膳食酵母补充水平之间是否存在显著相关性？本研究提供了对室间矿物质动力学（瘤胃-血清-肌肉）的新颖评估，这在反刍动物营养研究中仍未充分探索。该研究假设活酵母补充增强瘤胃溶解度，改善全身生物利用度，并通过调节瘤胃微生物活性和矿物质吸收途径促进必需微量矿物质的更大组织沉积。因此，本研究旨在评估不同水平的口服酵母如何影响生长羔羊的生长性能、微量矿物质代谢以及瘤胃液、血液血清和肌肉中的矿物质水平。

材料与方法

实验设计与羔羊管理

本研究于2020年春季在沙特阿拉伯利雅得国王大学动物生产系动物实验站进行。利雅得地区属于炎热沙漠气候，全年极度干旱，降雨极少。实验期间，平均环境温度（AT）、相对湿度（RH）和温湿度指数（THI）分别为20.0±0.50°C、49.30±1.53%和64.60±0.58。共使用24头健康的Awassi羔羊，平均年龄3.00±0.50个月，活体重24±1 kg，随机分为三个处理组，每组八头单独围栏的羔羊（每栏一头羔羊）。羔羊被随机分配到三个处理组，每组八头羔羊（n=八个重复栏；一头羔羊/栏），提供足够的重复和统计功效，得到先验功率分析的支持。羔羊被饲养在单独的3.5 m2栏中，以允许自然运动和活动。处理包括每日口服灌服10 mL自来水（YS0.00指对照组）、1.5 g活酵母溶解在10 mL水中（YS1.50）或3.0 g活酵母溶解在10 mL水中（YS3.00）。所有羔羊在整个研究期间保持在相同的环境条件下。在预备期期间，每头羔羊用独特的识别号进行耳标。随后，它们被饲养在单独的栏中，提供单独的饲喂器和水桶。水是自由饮用的。羔羊有两周的时间适应实验条件，然后开始实际试验。它们在第一周逐渐从干草过渡到颗粒全混合日粮（TMR），并在第二周专门饲喂颗粒TMR。在整个60天的试验中，所有处理组遵循相同的饲喂方案，TMR按照NRC指南以体重的3.0%提供。TMR是一种平衡的商业日粮，配方满足所有营养需求。为了查看额外纤维是否影响摄入、生长和矿物质代谢， alongside the TMR，添加了磨碎的罗德草干草（RGH），高于NRC推荐的每日饲料摄入量（DFI）25%。活酵母被包括作为增强纤维消化和矿物质吸收的辅助因子。虽然平均每日TMR摄入量（ADTMRI）保持不变，但平均每日RGH摄入量随着酵母补充而增加，表明纤维利用和矿物质动力学改善。TMR和成分的营养价值在表1中报告。羔羊每周称重，饲料分配（3.00% BW）相应每周重新计算。

近似和纤维分析

在研究结束时，随机收集三个 pooled 代表性饲料样品以评估其营养成分。样品在100°C下烘干4小时以确定干物质（DM）含量，随后在550°C的马弗炉中灰化3小时以测量灰分含量。AOAC方法用于近似分析：灰分（AOAC, 2006; 942.05）、水分（AOAC, 2006; 930.15）、粗蛋白（AOAC, 2006; 990.03）、乙醚提取物（AOAC, 2006; 920.39）、粗纤维（AOAC, 2006; 978.10）以及酸（ADF）和中性（NDF）洗涤纤维（AOAC, 2006; 973.18）。

生长性能评估

在每天09:00灌服活酵母60天后，以促进更稳定的瘤胃发酵和持续营养可用性，羔羊在09:00和15:00两次等分提供其TMR日粮，如Mokhtar等人所述。平均每日TMR摄入量（ADTMRI）和平均每日罗德草干草摄入量（ADRGHI）通过称量每头羔羊提供的量，使用电子秤减去剩余量，并在实验期间平均每日值，随后计算每日饲料摄入量（DFI）来确定。组间个体TM消耗未直接测量；饲料提供和剩余记录在组水平。因此，摄入量表示为每头羔羊的平均每日DMI，基于组水平数据。所有羔羊每周在喂食前单独称重一次。每头羔羊的平均日增重（ADG）使用每周记录的平均日增重之和计算。最后，每头羔羊的饲料转化率（FCR）计算为每日饲料摄入量与ADG的比率。未测量每组的微量矿物质摄入量；仅确定了瘤胃液、血液血清和肌肉中的浓度，以评估矿物质溶解度、生物利用度和组织沉积。

生物样品的制备和提取

在补充开始前收集基线瘤胃液和血液血清样品，分析确认组间无预处理差异。在瘤胃液中，Mn、Fe、Cu、Zn、I、Se和Co的基线浓度（μg/ml）分别为50.0、6.0、15.0、28.0、1.60、3.50和0.60，而在血液血清中，它们分别为0.16、0.60、2.25、0.28、0.20、0.15和0.12。

血液样品

在研究中，从总共24头健康羔羊在研究结束时收集血液样品。血液血清通过血液样品在4°C温度下以3000 g离心10分钟获得。血清立即用10%三氯乙酸（TCA）（1:4 血清:TCA）处理并离心（1,500×g 10分钟）。收集上清液并储存在-20°C，直到对血清进行微量矿物质分析。

瘤胃采样

通过使用连接真空泵的口腔胃管从每个处理组的六头羔羊获取瘤胃液样品，丢弃初始50 mL以最小化唾液污染，遵循Abdelrahman的方案。从每头羔羊收集大约50 mL瘤胃液。样品在实验期结束早晨喂食前一小时收集。收集后，瘤胃液样品倒入标记的玻璃管中。随后，样品通过四层棉纱布过滤。然后，过滤的样品在1000 g下离心10分钟一次。 resulting 上清液转移到Eppendorf管中，然后适当标记并冷冻储存在-20°C以供进一步分析。

肌肉采样

在研究结束时，所有来自三个处理组的羔羊（24头羔羊）按照Halal实践屠宰。屠宰后立即称量胴体和非胴体组件。所有胴体在4°C下冷却24小时。从第9到12胸椎两侧切除胸最长肌（LT）肌肉用于分析肌肉TM浓度。样品立即 pipetted 以防止沉降 before removing the sample。对于微量矿物质分析，0.50±0.01 g瘤胃液和肌肉样品在消化玻璃管中称重（三重重复）。然后，加入3 mL H₂NO₃（65% Riedel-de Haen, Germany）、1–2 mL HCl（36% Avonchem, UK）和2 mL H₂O₂（30% w/v Avonchem, UK）。样品消化30至60分钟，直到溶液变清，之后加入1 mL蒸馏水。消化后冷却试管。使用0.1当量HCl溶液将样品稀释至25 mL在烧瓶中， after filtration using ashless filter papers。取子样品在管中进行分析。样品储存在冰箱中用于微量矿物质分析。

矿物质分析

使用配备MEINHARD雾化器（包括Type A2）的ICP-OES测定本研究中的微矿物质浓度。使用氩气（纯度高于99.99%，由AH Group, Dammam, Saudi Arabia供应）维持等离子体并作为载气。ICP-OES分析的操作条件如下：1300.00 W RF功率、15.00 L min^?1等离子体流量、0.20 L min^?1辅助流量、0.80 L min^?1雾化器流量和1.5 mL min^?1样品摄取速率。轴向和径向视图用于金属测定，而2点背景校正和三个重复用于测量分析信号，处理模式为峰面积。为确保准确性，获得了对光谱干扰 free 的最敏感线的发射强度。校准标准通过稀释储备多元素标准溶液（1,000 mg L^?1）在0.5%（v/v）硝酸中制备。所有元素的校准曲线在1.00 ng mL^?1–1.00 μg mL^?1（1–1,000 ppb）范围内。使用标准溶液和回收测试验证ICP-OES仪器校准，加标回收率范围从95到102%，确认分析准确性。

统计分析

本研究收集的数据根据完全随机设计使用SAS软件（SAS Institute, Cary, NC, version 9.4）的PROC MIXED程序进行统计分析。然后，计算最小二乘均值用于在显著性水平α=0.05下的处理比较，当p值小于0.05（p<0.05）时使用LSMEANS的PDIFF选项。Pearson相关系数也用于解释生长羔羊血液血清、瘤胃液和肌肉中微量矿物质水平之间的关系。每组八头羔羊的样本量被认为足以检测中等处理效应（power ≥0.80, α=0.05），与小反刍动物营养研究一致。进行线性和二次对比以评估剂量趋势。

结果

性能指标

表2说明了酵母补充对各种生产力变量的影响，包括每日饲料摄入量（DFI）、平均日增重（ADG）、平均每日罗德草干草摄入量（ADRGHI）、平均每日TMR摄入量（ADTMRI）和饲料转化率（FCR）。总体而言，在所有实验期间（第0-4周、第5-8周和整体），处理组之间对于DFI没有观察到显著差异，并且对于ADG和ADTMRI观察到类似结果。虽然ADTMRI保持不变，但平均每日RGH摄入量随着酵母补充而增加，表明纤维利用改善。值得注意的是，YS3.00组的羔羊表现出显著更高的线性增加 in ADRGHI consumption compared to the other groups。然而，YS3.00组的补充在第5至8周期间显著增强了FCR compared to other treated groups。FCR值在所有组中相似—YS0.00、YS1.50和YS3.00分别为5.63、5.92和5.20—但这些差异不显著。

血液、瘤胃液和肌肉中的微量矿物质评估

酵母补充（YS）不同水平对羔羊血液血清中微量矿物质的影响总结在表3中。观察到Mn、Cu和Se浓度的显著变化（p<0.05），这些在处理组（尤其是在YS1.50中）显著高于Y0组。然而，在所有组中，其他TM的含量没有观察到显著差异（p<0.05）。在瘤胃液中，大多数TM浓度（YS0.00、YS1.50和YS3组每头 germ）存在显著变化（p>0.05）， except for I。一般来说，处理组（YS1.50）显示出显著较低的TM浓度 compared to the other groups。这种差异在处理组的羔羊中尤为明显， except for Cu and I，它们在YS1.50组中显示出显著较低的值。然而，Zn没有遵循这种趋势（表4）。结果表明，1.50 g酵母补充对羔羊肌肉中大多数TM的浓度有显著影响。一般来说，TM水平在YS0.00组中显著较低（p<0.05） than in the treated groups。然而，在组间没有观察到I浓度的显著差异（表5）。一般来说，碘在所有TM中不受YS在血液、瘤胃液和肌肉中的影响。

微量矿物质相关性

进行相关性分析（R²）以了解血液血清、瘤胃液和肌肉样品中补充的微量矿物质之间的关系。观察到各种研究矿物质之间的高度显著（p<0.01）相关性，增强了测试的功效，并且这里讨论值 above 0.01，如图1所示。在生长羔羊的血液血清、瘤胃和肌肉中，TMs与不同水平的溶解酵母之间存在显著相关性（p>0.05） for Mn, Fe, Cu, Zn, I, Se, and Co（图1）。一般来说，在血清中Zn和Co的浓度与瘤胃液（Fe和Cu）和肌肉样品（Mn、I和Se）中的TM浓度之间没有观察到显著相关性。然而，在血清中的TM浓度与瘤胃液和肌肉样品中的那些之间存在显著相关性。具体来说，结果表明，在血液血清中Mn、Fe、I和Se的浓度与它们在瘤胃液和肌肉样品中的相应TM浓度之间存在显著相关性。例如，血液血清中的Mn与瘤胃液中的Mn显示出强正相关（R²=0.96），以及与肌肉样品中的Mn强负相关（R²=-0.97）。类似地，血液血清中的Fe与瘤胃液中的Fe显示出强正相关（R²=0.96），并且血液血清中的Se与肌肉样品中的Se显示出强正相关（R²=0.94）。有趣的是，相关性表明血液血清、瘤胃液和肌肉样品中TM浓度之间存在相互关系，特别是在YS给药期间。在YS补充期间，瘤胃液中的Mn水平与肌肉中的Mn水平显示出强负相关（R²≤0.96）。瘤胃液中的Fe与肌肉中的Fe正相关（R²≤0.98; p>0.05）， with the effects of Fe in meat。在最高YS水平（YS1.50），瘤胃液中的Mn、Se和I与它们在肌肉样品中的 respective concentrations 显示出强正相关（R²≤0.96 for Mn; R²≤0.99 for Se and I）。相反，Zn与肌肉样品中的Se负相关（p>0.05; R²≤-0.88）。总体而言，在瘤胃液、血液血清和肌肉样品之间没有发现Cu和Co的显著相关性。总体而言，酵母补充的效果在1.50 g时显著（p>0.05） higher on all TM concentrations in the blood serum of the growing lambs compared to the YS0.00 group。然而，瘤胃液中的TM浓度在YS1.50和YS3.00组中最低（p>0.05）， as expected for I concentrations， which were higher than those in the YS0.00 group。对于肌肉样品，TM状态一般来说在YS1.50组中对于Mn、Cu、I、Fe、Zn、Se和Co最低（p>0.05）， except for Zn， which was significantly（p>0.05） higher in the YS1.50 group。

讨论

在本研究中，对整体DFI、ADG、ADCI和FCR的影响不显著。另一方面，YS确实显示出对生长羔羊中ADRI的显著影响。此外，用1.50 g溶解在自来水中的YS补充在第5和第8周期间显著增强了ADCI和FCR。这些发现与一些先前的研究一致，并与其他研究形成对比。一些研究表明微量矿物质之间存在相互作用（协同和拮抗）。这影响无机和有机膳食组分的吸收、可用性、利用和边际缺乏。酵母补充可能通过稳定瘤胃pH、减少不溶性沉淀物形成以及将过量矿物质结合到微生物细胞壁来减轻矿物质拮抗作用，从而促进改善的肠道吸收。膳食因素在微量元素的生物利用度、吸收和积累中起着关键作用。这方面的一个典型例子是铁与其他元素之间的相互作用。铁表现出与铜（Cu）和锌（Zn）的拮抗行为。此外，元素如Cu、Se和钴（Co）与钼（Mo）、碘（I）、锌（Zn）、铁（Fe）和镁（Mg）具有拮抗相互作用。值得注意的是，铜对铁、Mo和硫（S）的抑制特别敏感。这些相互作用突出了膳食因素与微量元素可用性之间复杂的关系，进一步强调了在营养和健康相关研究中考虑这些动态的必要性。在放牧绵羊中，牧场中Mo水平的增加仍然是一个重要问题，尤其是在膳食S存在的情况下。牧场中低至1 mg Mo per kg^?1 of DM对Cu吸收和储存有显著影响。这反过来影响其在动物组织中的存在；例如，低Cu状态与改变的血液血清生化谱、骨骼和神经 disorders、差的活重增加、受损的免疫力和抗氧化能力以及农场动物受损的繁殖性能有关。此外，矿物质相互作用的变化可能 account for certain disparities。本研究与先前的发现一致，这些发现报告了酵母补充改善了Se和Cu的生物利用度，以及与Gowda等人的研究一致，他们观察到羔羊中Cu和Zn状态的增强。然而，与Abdelrahman等人的发现 divergence，他们注意到瘤胃和组织矿物质浓度的增加，可能是由于基础日粮类型（基于草料与TMR）和矿物质周转的差异。羔羊中过量摄入Fe和Zn会降低血浆和肝脏中的Cu浓度，可能通过胃肠道中形成不溶性混合Fe和Cu硫化物或Zn介导的Cu吸收抑制。因此，高瘤胃Fe可能通过沉淀不溶性硫化物抑制Cu吸收，而过量Zn可能通过竞争肠道运输位点损害Cu摄取。在当前调查中，YS1.50组中较低的瘤胃Fe和Zn水平可能减轻了这些拮抗效应，导致血清Cu浓度增加。相反，与YS0.00组相比，YS1.50和YS3.00组肌肉中Mn水平较低可能表明Mn被优先用于具有更高代谢周转的组织中的酶功能，而不是用于骨骼肌中的积累。YS1.50组血液和肌肉中Mn、Fe、Se和I浓度的有利关联表明酵母补充改善了循环池和组织储存之间的矿物质分配。这些关系与Abdelrahman和Hunaiti的发现一致，尽管它们与几个实例不同，其中组织矿物质浓度与血清水平不匹配，推测是由于短期补充或酵母剂量不足。有趣的是，许多矿物质与其他一些矿物质表现出协同和拮抗相互作用，如Fe-Cu、Fe-Mn和Zn-Mn；这些矿物质之间的平衡更加复杂，在将它们添加到动物日粮时需要更多注意。因此，在我们的研究中，我们旨在了解生长羔羊血液血清、瘤胃和肌肉中Mn与不同水平的溶解酵母补充之间的关系。我们的结果表明，在接受1.50 g/头的组中，血清Mn浓度显著增加 compared with other groups，而碘浓度在组间没有显著差异。结果显示出与Abdelrahman和Hunaiti报告的趋势相似，他们发现生长羔羊中铜、锌和钴的生物利用度及其生长性能通过补充2.00 g/天的YS得到改善。Zhang等人发现，将酵母培养物与有机Se补充结合增加了母猪中的Se、Cu和Zn水平，同时通过增加谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和超氧化物歧化酶（SOD）活性改善抗氧化能力，最终导致改善的动物健康和生产性能。当前的发现与他们的Se发现一致，尽管物种、生产阶段和基础日粮组成发生变化。Se响应中的收敛支持了这样一个概念：来自酵母的有机Se（ mostly selenomethionine）比无机源更有效地吸收到动物组织中， regardless of ruminant or monogastric physiology。与Zhang等人不同，当前调查发现特定肌肉矿物质浓度下降（ higher YS doses时的Fe和Mn），这可能反映了矿物质重新分配朝向代谢过程或抗氧化系统，而不是在肌肉组织中储存。基于小反刍动物的营养需求，国家研究委员会（NRC）推荐绵羊的Se补充水平为0.10–0.30 mg/kg日粮干物质，以满足其维持和生长需求。NRC和Suttle表明，绵羊日粮中Se的MTL为2.00 mg/kg DM。当膳食Se摄入量在 extended periods 超过5.00 mg/kg DM时，可能发生慢性硒中毒（碱病），而当超过10.00 mg/kg DM时，可能发生急性毒性（盲 staggers）。因此，本研究中使用的Se补充水平保持在MTL 2.00 mg/kg DM以下，并且远低于毒性阈值（>5.00 mg/kg DM）。虽然实验在春季 modest thermal settings 中进行，当时平均THI为64.60，低于绵羊的通常热应激（HS）水平（THI≥72.00），但血清和肌肉中Se富集的模式与在更高热负荷下进行的实验的发现一致。这表明Se酵母的抗氧化效应不限于减轻HS。在较热地区（THI≥72），Se响应由于氧化应激而增加，但变化方向保持一致。研究表明，THI小于72.00反映无HS，72.00至78.00之间的值表示轻度HS，78至小于90.00的值表示中度HS，90.00或更高的值表示严重HS。在这些 modest thermal settings 下，热负荷引起的氧化损伤很可能最小。尽管如此，富硒酵母可能改善抗氧化防御，因为来自酵母的有机硒（ mostly selenomethionine）容易吸收到抗氧化酶中，如谷胱甘肽过氧化物酶。这可以解释YS1.50组中血清和肌肉Se浓度的持续增加，尽管缺乏显著的环境HS。如夏季试验中所发现的更高THI条件可能使Se酵母的抗氧化效应更加明显， due to increased reactive oxygen species production。当前研究发现，1.50 g/天的酵母补充（YS1.50）显著增加生长羔羊中Mn、Cu和Se的血清浓度，同时降低瘤胃液中的大多数TM浓度。这种模式与Abdelrahman和Hunaiti的发现一致，他们观察到补充2.00 g/天酵母的Awassi羔羊中血清和组织Zn、Mn和Co水平增加。这些变化伴随着通过改善吸收效率提高矿物质生物利用度的迹象，以及改善的生长性能。这里瘤胃矿物质浓度的减少表明更快速转移到系统循环，类似于Abdelrahman的发现，其中直接饲喂微生物增强羔羊的早期矿物质状态。相反，Pal等人观察到，酿酒酵母酵母补充， with or without TMs，增加了Black Bengal kids的瘤胃和组织矿物质浓度。这种变化可归因于日粮类型（基于草料与颗粒TMR）、矿物质背景水平和酵母形式和剂量的变化。在本研究中，YS1.50和YS3.00水平下瘤胃矿物质浓度的减少可能反映了改善的吸收效率（矿物质更快速地从瘤胃转移到血液），而Pal等人报告的更高瘤胃矿物质浓度可能表明在他们的饲喂条件下较慢的周转率或更高的瘤胃结合能力。在所有实验中，酵母补充似乎通过改善瘤胃微生物活性和稳定瘤胃pH来促进系统矿物质消耗，这增强某些微量元素的溶解度和运输。然而，来自饲喂含YS日粮的羔羊的肌肉样品显示出显著较低的水平，包括Mn、Cu、I、Fe、Se、Zn和Co的总体均值（YS1.50和YS3.00）。大多数TM在YS1.50组中低于YS0.00组。我们的数据显示瘤胃液中TM水平下降，随后血液血清中增加和肌肉样品中减少。减少瘤胃液中的TM影响肌肉中的TM沉积。在最高YS补充下，Mn和Fe在血液、瘤胃液和肌肉样品之间的更强正相关 compared with the control（YS0.00）。血液血清中I和Se的浓度与它们在肌肉样品中的水平显著高度相关，尤其是在YS1.50水平。这些结果表明，血液中TM的浓度与它们在肌肉样品中的相应水平之间存在关系。正相关表明血液中Mn、Fe、Se和I的水平反映了它们在肌肉样品中的浓度，YS1.50显示出特别强的关联。另一方面，瘤胃液中Mn和Zn与肌肉样品中Mn和Zn之间存在负相关；这 reinforce 一些矿物质对其他一些矿物质具有协同和拮抗效应。在本研究中，相关性结果表明，通过YS在1.50 g下操纵瘤胃消化率对血液样品中的TMs有显著影响，并且 consequently，表现为肌肉样品中TM水平的可辨别改变。研究之间的差异也可能反映基础日粮的矿物质组成。根据先前的研究，高膳食Fe、S或Mo水平会降低Cu和Se吸收。在本调查中，YS1.50水平下瘤胃Fe和Zn的减少可能缓解了这些拮抗效应，导致观察到的血清Cu增加。Pal等人没有报告 such reductions，推测是由于他们基于草料的日粮中较低的膳食Fe和S水平。本试验使用每天两次喂食，这已被证明与每天一次喂食或自由采食系统相比改善瘤胃pH和矿物质溶解度。Abdelrahman和Hunaiti使用了 comparable feeding frequency；然而，Pal等人使用了更灵活的饲喂计划，这可能解释了矿物质动力学的一些差异。这些发现表明，中间剂量（YS1.50）在增加系统矿物质可用性方面比更高剂量（YS3.00）更成功。在1.50 g/天比3.00 g/天更好的响应可能反映了更高酵母包含水平下的微生物饱和或矿物质之间竞争共享运输途径，如Abdelrahman和Hunaiti和Zhang等人所建议。在本研究中，线性和二次对比揭示了几种血清和瘤胃微量矿物质的显著剂量趋势，确认对酵母补充的剂量依赖性响应。Abdelrahman和Hunaiti也发现， modest yeast inclusion resulted in excellent results，表明非线性剂量-响应关系，最可能 due to microbial saturation or competing mineral absorption mechanisms。Zhang等人 confirmed the superiority of Se yeast over inorganic Se for tissue deposition。这与有机形式更好的生物利用度一致。组间个体