天冬中性果聚糖多糖ACRP通过TLR4/MyD88/NF-κB通路介导巨噬细胞重编程抑制骨肉瘤研究

本研究首次从天冬 rhizome 中分离纯化获得中性果聚糖多糖ACRP，其通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路，有效重编程肿瘤相关巨噬细胞（TAM）从M2向M1表型转化，促进ROS、NO、TNF-α等炎症因子释放，显著抑制骨肉瘤细胞增殖并促进凋亡，为骨肉瘤免疫治疗提供了新型天然候选药物。

　　

亮点

化学品与试剂

天冬 rhizome 采自中国四川省内江市。小鼠IL-4和ROS检测试剂盒购自Abbkine公司（中国武汉）。刚果红、LPS（脂多糖）和中性红购自Sigma-Aldrich公司（美国密苏里州）。CD16/32、F4/80、CD206和CD86抗体采购自BioLegend公司（美国加州）。阿霉素（ADM）购自深圳主健药业股份有限公司。DMEM（杜尔贝科改良鹰培养基）等细胞培养试剂均符合国际标准。

ACRP的制备与理化特性

粗多糖CARP通过热水提取、乙醇沉淀和脱蛋白预处理后，经DEAE阴离子交换层析和Sephacryl S-300凝胶层析纯化获得ACRP组分。洗脱图谱中呈现单一对称峰（图1A，图S1），证实ACRP结构均一性。苯酚-硫酸法测定其碳水化合物含量达97.29%，而BCA法检测蛋白质含量仅为0.83%。分子量分布经HPGPC（高效凝胶渗透色谱）分析显示数均分子量（M_n）为2617 Da，重均分子量（M_w）为3426 Da，分散系数（M_w/M_n）为1.31，表明其为低分子量窄分布多糖。

结论

本研究从天冬 rhizome 中鉴定出一种低分子量果聚糖（M_n＝2617 Da，M_w＝3426 Da，M_w/M_n＝1.31），其结构特征为含有β-1,2连接的呋喃果糖（Fruf）和α-1,6连接的吡喃葡萄糖（Glcp）残基，以及末端T-Glcp和2-Fruf单元。该多糖展现出强大的免疫调节与抗肿瘤效应：ACRP能有效激活巨噬细胞，促进关键促炎介质（ROS、NO、TNF-α和IL-12p70）的产生，并诱导M2极化巨噬细胞向M1表型重编程，从而显著抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。机制研究表明该过程通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导。体内实验进一步证实ACRP能重塑肿瘤微环境中的免疫细胞浸润，显著提升CD3⁺CD4⁺和CD3⁺CD8⁺T淋巴细胞水平，有效抑制骨肉瘤进展。这些发现为ACRP作为骨肉瘤免疫治疗候选药物提供了坚实理论基础。