急性髓系白血病中LAG-3、TIM-3和PD-1在NK细胞与T细胞的表达特征及其与患者生存的关联研究

本研究针对急性髓系白血病（AML）患者免疫应答机制失调的临床难题，系统分析了NK细胞、T细胞及NKT样细胞中LAG-3、TIM-3和PD-1抑制性检查点的表达模式。研究发现LAG-3的高表达与患者生存期显著正相关，而LAG-3+TIM-3+PD-1-细胞群的保留更预示良好预后。该成果为AML免疫治疗提供了新型生物标志物，并为检查点阻断疗法的精准应用奠定了理论基础。

在血液系统恶性肿瘤中，急性髓系白血病（AML）以其高侵袭性和复发率成为临床治疗的重大挑战。尽管化疗和靶向治疗取得进展，患者长期生存率仍不理想，尤其老年患者预后更差。近年来研究发现，AML细胞通过调控免疫检查点分子逃避免疫监视，导致T细胞和NK细胞功能衰竭，这为免疫治疗提供了新方向。然而，不同检查点分子在AML免疫微环境中的具体作用机制及其临床意义尚未明确，特别是LAG-3、TIM-3与PD-1的协同表达模式对患者预后的影响亟需深入探索。

为系统解析AML免疫微环境特征，研究人员采集26例新诊断AML患者和20例健康对照者的外周血样本，通过密度梯度离心分离外周血单核细胞（PBMCs），采用多参数流式细胞术检测NK细胞（CD3^-CD56⁺）、常规T细胞（CD3⁺CD56^-）和NKT样细胞（CD3⁺CD56⁺）中LAG-3、TIM-3和PD-1的表达水平。运用布尔门控技术和SPICE软件分析检查点共表达模式，通过UMAP降维和FlowSOM聚类揭示细胞亚群差异，并结合Kaplan-Meier生存分析评估其临床意义。

Expression of LAG-3, TIM-3 and PD-1 in NK cells, T cells and NKT-like cells

研究发现AML患者NK细胞比例显著低于健康供体（11.02% vs 19.82%），而T细胞和NKT样细胞比例无显著变化。TIM-3在AML患者的NK细胞（81.93% vs 89.09%）、T细胞（54.18% vs 59.80%）和NKT样细胞（56.85% vs 62.85%）中表达均下调。LAG-3表达虽无组间差异，但个体间异质性显著。PD-1在AML患者CD8⁺ T细胞中呈现上调趋势。

Co-expression of LAG-3, TIM-3 and PD-1 in NK cells, T cells and NKT-like cells

共表达分析显示AML患者NK细胞和T细胞中LAG-3⁺TIM-3⁺PD-1^-亚群比例显著降低，而LAG-3^-TIM-3^-PD-1⁺ T细胞比例增加。NKT样细胞中三重阴性细胞（LAG-3^-TIM-3^-PD-1^-）比例升高。UMAP分析进一步证实AML患者PD-1⁺TIM-3⁺CD8⁺ NK细胞亚群减少。

Correlation of LAG-3, TIM-3 and PD-1 expression

相关性分析揭示LAG-3、TIM-3和PD-1表达在淋巴细胞亚群间存在协同调控模式。T细胞中LAG-3与TIM-3表达呈正相关（r=0.62, p<0.01），且LAG-3在T细胞与NK细胞间的表达具有显著一致性（r=0.58, p<0.05）。

Preserved LAG-3 expression at diagnosis is associated with patient survival

生存分析显示LAG-3高表达组（Cutoff: NK细胞57%, T细胞49%, NKT样细胞50%）中位生存期显著延长（p<0.05）。生存超过6个月的患者LAG-3⁺细胞比例显著高于短期生存组（NK细胞68.3% vs 52.1%, p=0.032）。多因素分析证实LAG-3⁺ NK细胞（HR=0.41, p=0.018）和NKT样细胞（HR=0.39, p=0.011）是独立保护因素。

Analysis of LAG-3, TIM-3 and PD1 co-expression pattern and its association with patient survival

共表达模式与生存关联分析表明，LAG-3⁺TIM-3⁺PD-1^-细胞比例在长期生存组中接近健康水平，而LAG-3^-TIM-3⁺PD-1⁺细胞群几乎仅存在于短期生存患者（p=0.037）。三重阳性细胞（LAG-3⁺TIM-3⁺PD-1⁺）虽与不良预后相关但未达统计学显著性。

本研究突破性地揭示LAG-3在AML免疫监测中的双重角色：其高表达不仅反映淋巴细胞活化状态，更是良好预后的关键指标。不同于传统 exhaustion 标记物理论，LAG-3⁺TIM-3⁺PD-1^-表型可能代表功能活跃的效应细胞群，而LAG-3缺失则提示免疫应答缺陷。研究为AML免疫分型提供了新型生物标志物组合，证实检查点表达异质性可解释免疫治疗应答差异。未来需扩大样本验证LAG-3调控机制，并探索抗LAG-3单抗与去甲基化药物的协同治疗策略，最终实现AML免疫治疗的精准化应用。