压力通过皮质酮介导的CD8+ T细胞耗竭促进非小细胞肺癌进展的机制研究

本研究揭示了心理压力通过激活下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴促进皮质酮（COR）释放，经糖皮质激素受体（GR）信号通路诱导肿瘤浸润CD8+ T细胞功能耗竭（表现为PD-1+/TIM-3+上调及IFN-γ/GZMB分泌抑制），最终加速非小细胞肺癌（NSCLC）进展。GR抑制剂RU486可逆转该过程，为靶向神经内分泌-免疫互作提供治疗新策略。

　　

背景

随着社会节奏加快和生活压力加剧，心理压力对癌症患者健康的影响日益凸显。流行病学研究显示，焦虑或抑郁患者不仅癌症发病率更高，且肿瘤特异性死亡率和全因死亡率显著上升。非小细胞肺癌（NSCLC）作为占肺癌80-85%的主要亚型，其进展与心理压力密切相关，尤其免疫检查点抑制剂对伴有情绪障碍的患者疗效显著降低。尽管压力通过交感神经系统和HPA轴释放儿茶酚胺与糖皮质激素（GCs）影响肿瘤免疫微环境，但其对NSCLC中CD8⁺ T细胞的具体调控机制尚未明确。

材料与方法

研究采用C57BL/6J和DBA/2雄性小鼠构建急性束缚应激（AR）模型，通过旷场实验、高架十字迷宫和强迫游泳试验评估焦虑样行为。皮下接种LLC或KLN205肺癌细胞后，使用流式细胞术分析肿瘤免疫细胞浸润，免疫荧光检测PD-1、TIM-3、GR等蛋白表达，ELISA测定血清ACTH、COR等激素水平。通过磁珠分选肿瘤CD8⁺ T细胞进行智能RNA测序，并采用qRT-PCR验证T细胞受体信号通路关键基因。体外实验以COR处理原代CD8⁺ T细胞，联合GR抑制剂RU486评估细胞活力与效应功能。

结果

压力促进NSCLC进展并诱导焦虑样行为

AR处理显著减少小鼠中央区域探索时间与运动距离，证实焦虑样行为形成。同时，AR组肿瘤体积与重量显著增加，且焦虑行为指标与肿瘤生长呈正相关，而抑郁样行为无显著关联。

压力重塑肿瘤免疫微环境

流式细胞分析显示，AR组肿瘤组织中CD45⁺免疫细胞、髓系细胞、巨噬细胞及CD4⁺/CD8⁺ T细胞比例下降，但NK细胞比例上升，提示压力导致免疫抑制性微环境形成。

CD8⁺ T细胞耗竭是关键机制

压力显著抑制CD3⁺ T细胞中TNF-α、IFN-γ、颗粒酶B（GZMB）和Ki67表达，并上调PD-1、LAG3、TIM-3等耗竭标志物。在CD8⁺ T细胞中，PD-1⁺和TIM-3⁺比例升高而Ki67⁺比例降低，免疫荧光进一步证实CD8⁺ T细胞浸润减少且表面抑制性受体表达增加。

HPA轴激活与COR-GR通路作用

AR小鼠血清ACTH和COR水平显著升高，且与焦虑行为及肿瘤体积正相关。肿瘤组织中GR表达上调，流式检测显示COR处理直接增强CD8⁺ T细胞GR表达。体内外实验表明，COR促进肿瘤生长并诱导CD8⁺ T细胞耗竭（IFN-γ/GZMB分泌减少，PD-1/LAG3/TIM-3表达增加），而RU486处理可逆转该效应。

智能RNA测序揭示T细胞受体信号通路激活

测序分析鉴定出1929个差异表达基因，KEGG和GSEA富集分析显示T细胞受体信号通路（mmu04660）显著激活。qRT-PCR验证COR上调Tec、Grap2、Ppp3cc等基因表达，且RU486抑制该效应。公共单细胞数据（TISCH2）证实GRAP2在NSCLC患者的耗竭性CD8_Tex细胞中高表达，且与PDCD1、LAG3、HAVCR2等耗竭基因正相关，提示GRAP2可作为COR诱导T细胞耗竭的关键分子。

讨论

本研究首次阐明压力通过HPA轴-COR-GR信号轴诱导CD8⁺ T细胞耗竭，从而促进NSCLC进展的机制。COR通过调控Tec/Grap2/Ppp3cc等基因增强T细胞受体信号通路活性，导致PD-1、TIM-3等抑制性受体上调及效应功能丧失。GR抑制剂RU486的逆转效应证实该通路的靶向治疗潜力。未来需开展临床研究验证压力相关激素对免疫治疗疗效的影响，并探索GR抑制剂联合免疫治疗在焦虑抑郁患者中的应用价值。