综述：中性粒细胞胞外诱捕网驱动癌细胞上皮-间质转化的作用

本综述系统阐述中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）通过激活多条信号通路（包括Notch、TGF-β、NF-κB等）诱导上皮-间质转化（EMT）的机制，揭示NETs作为炎症与癌症的交叉点，通过促进EMT程序增强肿瘤细胞迁移、侵袭和转移能力的重要作用，为靶向NETs的抗癌治疗提供理论依据。

　　

引言

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是活化的中性粒细胞释放的丝状结构，由双链DNA、组蛋白及多种蛋白酶（如髓过氧化物酶MPO、中性粒细胞弹性蛋白酶NE、基质金属蛋白酶9 MMP-9等）组成。NETs不仅存在于癌症患者的肿瘤组织和血液中，还能直接或间接调节癌细胞功能。近年研究发现NETs能通过不同信号通路驱动肿瘤生长和转移扩散，其中诱导上皮-间质转化（EMT）的作用尤为突出。

NETs驱动肿瘤生长

NETs通过蛋白酶介导的细胞外基质（ECM）重塑促进癌细胞增殖。NET衍生的NE和MMP-9降解层粘连蛋白，暴露与整合素α3β1结合的抗原表位，激活下游信号通路。NETs的DNA组分通过CCDC25受体激活整合素链接激酶（ILK）-β-PARVIN-RAC1-CDC42级联反应，增强乳腺癌细胞运动、侵袭和增殖能力。在弥漫大B细胞淋巴瘤中，NETs通过TLR9受体激活NFkB、STAT3和p38通路促进增殖。NETs中的高迁移率族蛋白B1（HMGB1）通过与RAGE和TLR9相互作用，分别在胶质母细胞瘤和结直肠癌细胞中激活MAP激酶通路促进增殖。动物实验证实，PAD4敲除（无法形成NETs）小鼠的肿瘤生长和肝转移显著减少。

NETs驱动转移扩散

NETs最初被认为通过机械捕获循环肿瘤细胞促进远处转移。在脓毒症动物模型中，肝血窦内NET沉积增加了肝微转移灶数量。后续研究发现癌细胞与NETs的结合涉及NET-DNA与CCDC25受体的相互作用，或NET相关纤连蛋白与癌细胞β1整合素的结合。手术应激通过NET形成促进结直肠癌肝转移，NET衍生的HMGB1与TLR9结合激活MAP激酶通路。手术应激还导致肺微血管NET沉积和血小板活化，形成血小板-肿瘤细胞聚集体，促进癌细胞在肺组织滞留。NETs还增强乳腺癌细胞侵袭能力，DNase I处理可显著减少小鼠肺转移形成。

NETs驱动上皮-间质转化

上皮-间质转化（EMT）是上皮细胞失去极性获得间质表型的可逆过程，由Zeb家族、Snail、Slug和Twist 1等转录因子（EMT-TFs）调控，导致E-钙黏蛋白下调、波形蛋白和N-钙黏蛋白上调。多种信号通路包括WNT、Hedgehog、NOTCH、TGFβ、酪氨酸激酶受体和细胞因子受体通路可激活EMT。

研究表明NETs能在不同正常和恶性细胞中诱导EMT：

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  内皮细胞暴露于NETs导致VE-钙黏蛋白快速丢失，细胞连接解体，β连环蛋白核转位上调Snail1
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  MCF-7乳腺癌细胞经NET处理出现形态学改变，Snai 1、Snai 2和Zeb 1基因转录增强，E-钙黏蛋白减少，纤连蛋白和β连环蛋白增加，干细胞标志物CD24/CD44比例改变
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  A549肺癌细胞在NETs作用下αSMA上调、E-钙黏蛋白下调，SARS-CoV2感染环境下NETs与肺泡巨噬细胞协同诱导EMT
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  胃癌细胞暴露于NETs后E-钙黏蛋白下调、波形蛋白上调，迁移能力增强，DNase I和PAD4抑制剂可阻断此效应
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  结肠癌细胞DLD1和SW480经NET处理出现细胞形态和肌动蛋白细胞骨架改变，波形蛋白、纤连蛋白、Zeb 1和Slug上调，EPCAM和E-钙黏蛋白下调
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  胃癌术后腹腔感染患者NETs水平升高，其中性粒细胞与癌细胞共培养诱导TGFβ依赖的EMT表型
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  非小细胞肺癌中NETs通过下调长链非编码RNA MIR503HG激活NF-κB通路（p50、p65磷酸化增加），促进NLRP3炎症小体激活
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  癌基因驱动肺癌细胞通过α5β1整合素和CCDC25受体粘附NETs，激活Notch 1信号诱导EMT
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  胰腺导管腺癌中NETs通过CCDC25-ITGB1-ILK信号轴上调Snai 1、Snai 2和Zeb 1表达

结论

NETs通过中性粒细胞弹性酶和DNA骨架依赖的机制诱导EMT，此过程可被弹性酶抑制剂和DNase I阻断。NETs激活的EMT相关信号通路包括β连环蛋白、细胞因子、TGFβ、NF-κB、Notch 1和ITGB1-ILK轴，这些通路可能独立或协同作用。NETs组成的异质性（受诱导因素和疾病状态影响）导致其诱导EMT的能力存在差异。蛋白质组学研究显示NETs包含2364种蛋白质，除经典标志物外，还富含钙锌结合蛋白、钙保护蛋白和RNA结合蛋白。

肿瘤微环境中，癌症相关成纤维细胞（CAFs）和肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）通过分泌TGFβ等因子与NETs协同诱导EMT。NETs通过诱导EMT增强癌细胞迁移、侵袭和转移能力，同时增加肿瘤异质性和治疗抵抗。间质表型癌细胞通过Zeb 1介导的miR-200抑制上调PD-L1导致T细胞耗竭，并通过分泌因子招募髓源性抑制细胞（MDSC）实现免疫逃避。

靶向NETs的形成（PAD4或中性粒细胞弹性酶抑制剂）、破坏NET结构（DNase I）或阻断特定信号通路，可能成为预防转移和提高治疗响应的新策略。理解NETs与癌细胞、基质细胞和免疫细胞相互作用的复杂网络，将为抗癌治疗提供新靶点。