Cinobufagin（华蟾酥毒基）靶向PDE4D破坏AD中成纤维细胞-树突状细胞互扰的新机制

本研究揭示了磷酸二酯酶4D（PDE4D）作为特应性皮炎（AD）炎症调控的关键靶点，并首次发现天然化合物cinobufagin通过直接结合PDE4D，上调cAMP/PKA/CREB信号通路，抑制MIF分泌，有效阻断成纤维细胞与树突状细胞（DCs）间的致病性串扰，为AD治疗提供了新型靶向策略。

　　

scRNA-seq揭示AD皮肤微环境中MIF通路的核心作用

通过分析单细胞RNA测序（scRNA-seq）数据（GSE147424），研究团队发现AD患者皮损组织中巨噬细胞移动抑制因子（MIF）信号通路显著激活，其中炎症性成纤维细胞是介导MIF与髓系细胞互动的关键细胞亚群。UMAP聚类分析将细胞分为13个亚群，包括成纤维细胞、炎症性成纤维细胞、T细胞、髓系细胞等。进一步细胞互作网络分析显示，MIF通路在AD皮损中具有最强的 outgoing/incoming 信号强度，且炎症性成纤维细胞通过分泌MIF，结合髓系细胞表面的CD74/CD44受体复合物，特别是LAMP3⁺树突状细胞（DCs），驱动免疫细胞活化与炎症应答。

Bufadienolides化合物抑制MIF通路的发现

研究团队对1191种天然小分子化合物进行筛选，发现蟾蜍来源的bufadienolides类化合物——resibufogenin与cinobufagin——能显著抑制IL-4诱导的炎症性成纤维细胞中Mif、Ccl5、Cxcr4等MIF通路相关基因的表达。其中cinobufagin抑制效果尤为显著。在此基础上，研究人员开发了bufadienolides膜剂，并在金黄色葡萄球菌感染的兔模型中验证了其改善皮肤红斑、减少表皮增厚和炎症细胞浸润的效果。

Cinobufagin显著改善MC-903诱导的小鼠AD模型

在MC-903诱导的小鼠AD模型中，cinobufagin口服给药能明显减轻耳部红肿、鳞屑和表皮增厚，降低血清中TSLP和IgE水平，并抑制耳组织中Th2型细胞因子表达。组织病理学显示炎症细胞浸润显著减少。值得注意的是，cinobufagin在发挥治疗作用的浓度下（100 ng·mL^?1）未显现细胞毒性，10 mg·kg^?1的连续口服给药也未引起系统性毒性反应，表现出良好的安全性。

PDE4D是cinobufagin的直接作用靶点

通过靶点色谱共洗脱鉴定技术（TICC），研究团队在pH 7.8和pH 5.0两种条件下筛选出22个cinobufagin潜在结合蛋白，其中PDE4D在AD皮损组织中表达显著上调。细胞热转移实验（CETSA）、药物亲和反应靶点稳定性试验（DARTS）、超滤质谱和分子对接结果一致表明，cinobufagin可直接结合PDE4D，增强其热稳定性及抗蛋白酶解能力。

Cinobufagin通过抑制PDE4D调控cAMP/MIF轴

PDE4D作为cAMP特异性水解酶，其抑制可导致细胞内cAMP水平升高。研究发现，cinobufagin处理能剂量依赖性地降低PDE4D蛋白表达、提升cAMP浓度、抑制MIF分泌。与已知PDE4抑制剂（zatolmilast、roflumilast）相比，cinobufagin对PDE4D的抑制作用和后续cAMP升高及MIF降低效应更为显著。在Pde4d敲低或过表达的成纤维细胞中，上述效应得到进一步验证，确认PDE4D对MIF表达具有正向调控作用。

cAMP/PKA/CREB通路介导cinobufagin调控的细胞互作破坏

研究表明，cAMP激动剂forskolin可抑制MIF分泌，而抑制剂SQ22536则促进其分泌。cinobufagin处理能显著增加CREB磷酸化（p-CREB）水平，且该效应可被PKA抑制剂H-89逆转。在成纤维细胞与骨髓来源树突状细胞（BMDCs）共培养体系中，cinobufagen或forskolin处理可降低BMDCs表面MHC II^high表达，而SQ22536则促进该表型——表明cinobufagin通过cAMP/PKA/CREB通路抑制DC活化，破坏成纤维细胞-DC间免疫串扰。

PDE4D基因敲除模拟cinobufagin的治疗效果

在Pde4d^?/?小鼠中，MC-903诱导的AD表型显著减轻，包括耳部肿胀减轻、炎症细胞浸润减少、血清TSLP/IgE水平下降以及耳组织Th2细胞因子表达下调。值得注意的是，cinobufagin对Pde4d^?/?小鼠未能进一步改善AD症状，证明其疗效依赖于PDE4D的存在，且PDE4D是其主要作用靶点。

讨论与展望

该研究不仅确立了PDE4D作为AD炎症调控的关键靶点，还首次发现蟾酥活性成分cinobufagin作为一种高效且特异性强的PDE4D抑制剂，通过调控cAMP/PKA/CREB/MIF轴，破坏成纤维细胞与DCs间的致病性交互，从而显著缓解AD症状。这一发现为开发天然来源的AD治疗药物提供了坚实理论基础和实验依据，也为针对PDE4D的靶向治疗策略开辟了新方向。