SARS-CoV-2病毒变异株对死胎率的影响——来自CRONOS登记处的数据

《Placenta》：Influence of SARS-CoV-2 virus variant on stillbirth rate - data from the CRONOS registry

本研究发现Bradykinin B2受体（B2R）下调通过激活Wnt信号通路抑制滋养层细胞自噬，导致其增殖、迁移和侵袭能力下降，进而引发子宫螺旋动脉重塑异常，为子痫前期治疗提供新靶点。

　　

潘伟晨|朱荣荣|王晓宇|王志音|刘丹|赵广峰|郑明明

南京医科大学南京鼓楼医院临床学院妇产科，中国南京

摘要

子痫前期（PE）是一种严重的妊娠并发症，其特征是在妊娠20周后出现高血压和蛋白尿，对母婴健康构成重大风险。尽管其确切病因尚不清楚，但滋养层侵袭不足和子宫螺旋动脉重塑受损被认为是主要致病因素。G蛋白偶联受体——缓激肽B2受体（B2R）在随后发展为PE的早期妊娠胎盘中表达下调。我们之前的研究还表明，B2R可以抑制绒毛外滋养层（EVT）的增殖和迁移。然而，其背后的机制仍不明确。通过分析B2R敲低后的HTR8细胞（一种EVT细胞系）的转录组，我们发现B2R下调会损害EVT的自噬功能。随后，我们确认PE患者胎盘中的EVT也存在自噬功能下降。体外实验进一步证明，B2R下调会导致HTR8细胞自噬缺陷，从而降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力。激活自噬可以缓解B2R下调引起的EVT细胞功能异常。机制研究揭示，B2R通过激活Wnt信号通路来抑制自噬。此外，我们构建了滋养层特异性B2R敲除小鼠，发现这些小鼠的胎盘自噬功能减弱，EVT侵袭能力不足，螺旋动脉重塑异常。这些发现表明，B2R调控的自噬对滋养层功能和螺旋动脉重塑至关重要。我们的研究强调了靶向自噬作为PE治疗策略的潜力，为这一复杂疾病的分子机制提供了新的见解。

引言

子痫前期（PE）是一种严重的多系统妊娠疾病，其特征是在妊娠20周后新发高血压（≥140/90 mmHg）和蛋白尿（≥300 mg/24h）。它对母体器官（如肝脏破裂）和胎儿（如宫内生长受限）构成重大风险。临床风险因素包括高体重指数（BMI >30 kg/m²）、既往PE病史、慢性高血压和高龄产妇（>35岁）[1]。胎盘的基本病理特征是滋养层侵袭不足和子宫螺旋动脉重塑受损，这些被认为是PE发病的主要因素。这种螺旋动脉重塑异常会导致胎盘缺氧，引发一系列细胞功能障碍。缺氧会引发线粒体功能障碍和过量的活性氧（ROS）产生，从而导致氧化应激。同时，代谢改变会进一步扰乱滋养层的脂质代谢和氨基酸转运，而某些酶活性的升高会加剧氧化损伤[2]。这些细胞和代谢紊乱最终会损害滋养层功能，导致PE的临床表现[3]、[4]、[5]。然而，螺旋动脉重塑异常的分子机制仍需进一步探索。

缓激肽B2受体（B2R）是一种在多种细胞中广泛表达的G蛋白偶联受体，在调节细胞生长、迁移和侵袭中起关键作用。研究表明，B2R激活可促进癌症和脑缺血疾病中的血管生成。值得注意的是，在后来发展为严重PE的妊娠早期绒毛中，B2R表达下调[3]。此外，在PE患者的胎盘中，血管紧张素AT1和B2R形成异二聚体，通过激活钙通道增强平滑肌敏感性，最终导致PE患者血压升高[4]。体内实验进一步证实，在妊娠早期至中期使用鼠选择性非肽类拮抗剂Bradyzide（BDZ）抑制B2R会阻碍胎儿发育，并减少妊娠豚鼠的螺旋动脉内滋养层侵袭[5]、[6]。这些发现表明，B2R功能障碍可能参与PE的发病机制。我们的初步研究显示，PE患者胎盘中的绒毛外滋养层（EVT）和合胞滋养层（STB）中B2R表达显著下降。使用小干扰RNA（siRNA）敲低HTR8细胞（一种EVT细胞系）的B2R后，其增殖、迁移和侵袭能力显著受到抑制，但背后的机制仍不清楚[7]。

自噬是一种高度保守且普遍存在的细胞和生物体生存机制。它通过降解细胞内的老化细胞器来维持细胞稳态，从而提供能量并确保细胞正常功能[8]。妊娠期间，母亲通过胎盘与胎儿交换能量，自噬在胎盘形成和妊娠维持过程中起着关键作用[9]。研究表明，在妊娠早期，蜕膜中的EVT自噬水平增加，这有助于它们的侵袭和血管重塑能力[10]。此外，研究指出，滋养层细胞自噬水平下降会削弱它们对抗氧化应激和炎症的能力，可能导致PE的发展[11]。然而，自噬在PE发病机制中的作用机制尚未完全明了[12]。

在此研究中，我们发现并验证了B2R在滋养层中的下调会通过降低自噬来损害其增殖、迁移和侵袭能力。在PE患者中观察到胎盘自噬功能下降。体外实验表明，HTR8细胞中B2R下调通过激活WNT信号通路来抑制自噬。最后，在滋养层特异性B2R敲除小鼠的胎盘中，我们发现自噬功能下降和螺旋动脉重塑异常。这些发现表明，螺旋动脉重塑异常是由B2R调控的自噬介导的，提示调节自噬可能成为未来治疗PE的有希望的治疗靶点。

部分内容

胎盘组织

南京鼓楼医院伦理委员会批准了胎盘组织的收集（伦理批准号2021-647-01），所有参与者均提供了书面知情同意书。PE定义为妊娠20周后出现的新发高血压（收缩压≥160 mmHg或舒张压≥110 mmHg）和/或蛋白尿（≥300 mg/24h）。本研究排除了糖尿病、肾脏疾病、慢性高血压和传染病等并发症。

B2R表达下调抑制绒毛外滋养层细胞的自噬

首先，我们通过将B2R小干扰RNA（si-B2R）转染到HTR-8/SVneo细胞中建立了B2R敲除细胞模型。结果显示，与对照siRNA（si-CTL）组相比，si-B2R组的B2R表达在mRNA和蛋白质水平上均下降（图1A和B）。接下来，我们对B2R敲除的HTR8细胞进行了转录组测序并进行了GO富集分析。测序结果见图1C。在20个最显著的变化中

讨论

本研究揭示，滋养层中B2R水平的下降通过激活Wnt信号通路来抑制自噬，从而导致滋养层侵袭、迁移和增殖能力受损。这可能干扰螺旋动脉的重塑，从而促进PE的发展。值得注意的是，这是首次阐明B2R在调节滋养层自噬中的作用，为研究PE的发病机制提供了新的见解。

作者贡献声明

赵广峰：撰写——审稿与编辑、方法学、概念构思。刘丹：撰写——审稿与编辑、方法学。郑明明：撰写——审稿与编辑、监督、资金获取、概念构思。朱荣荣：方法学、数据管理。潘伟晨：撰写——初稿、数据管理。王志音：撰写——审稿与编辑、方法学。王晓宇：软件支持

利益冲突声明

所有其他作者均声明无利益冲突。

致谢

本研究得到了中国国家重点研发计划（2021YFC2701603）、江苏省妇产科创新中心（CXZX202229）和江苏省自然科学基金（BK20220186）的支持。