拟南芥种子、幼苗及叶片冷冻核DNA损伤分析：彗星实验方案的优化与应用

本刊推荐：研究者优化了中性彗星实验（Comet Assay）方案，首次实现对拟南芥（Arabidopsis thaliana）种子、幼苗及叶片来源的细胞核进行冷冻保存与同步分析，突破传统流程连续性限制。该方案支持在非变性条件（N/N protocol）下高效检测双链断裂（DSBs），为植物响应生物/非生物胁迫的DNA损伤机制研究提供关键技术支撑。

　　

Significance statement（研究亮点）

我们提出了一种用于分析拟南芥种子、幼苗和叶片中分离的冷冻核DNA损伤的优化彗星实验方案。我们的方法引入了可暂停的临时处理步骤，允许对植物细胞核进行存储。该步骤涉及细胞核的冷冻保存与后续解冻过程，在保持DNA完整性的条件下实现样本的长期保存与批量同步处理。

Discussion and conclusion（讨论与结论）

在本研究中，我们开发了一个经过优化、稳健且多功能的彗星实验方案，适用于拟南芥种子、幼苗和叶片。我们采用涂片法制备琼脂糖预涂层玻片，并引入了明确的冷冻步骤以实现细胞核的长期低温储存（图1），显著提高了实验操作的灵活性。这些进展不仅简化了工作流程，还为研究者提供了处理与储存样本的更大自由度，尤其适用于动力学研究或大样本量的实验设计。

Uncited references（未引用参考文献）

（Araújo et al., 2019; Collins et al., 2023; Pagano et al., 2019）

CRediT authorship contribution statement（作者贡献声明）

Torres Jose Roberto： 撰写—原始稿与修订、可视化、验证、监督、方法设计、实验实施、形式分析、概念形成。

Ignacio Lescano Lopez： 撰写—修订、可视化、验证、方法设计、实验实施、形式分析。

María Elena Alvarez： 撰写—修订与原始稿、监督、资源调配、项目管理、资金获取、形式分析、概念形成。

Declaration of Competing Interest（利益冲突声明）

作者声明不存在任何已知的竞争性经济利益或个人关系，以避免影响本研究报告的客观性。

Acknowledgements（致谢）

本研究得到了阿根廷国家科学与技术促进局（PICT 2018-4588；PICT 2021-00805）和科尔多瓦国立大学（SECyT-UNC）的经费支持，谨致谢忱。