基于DARPins修饰轻链铁蛋白的双特异性靶向系统在癌症化疗中的应用研究

本综述推荐了一种创新性双特异性靶向策略：通过基因工程构建DARPin_9-29-FTLsh-EC1融合蛋白，并偶联单甲基澳瑞他汀E（MMAE）形成蛋白-药物复合物。该复合物可同时靶向人类表皮生长因子受体2（HER2）和上皮细胞黏附分子（EpCAM），显著增强对实体瘤的特异性结合、内化及杀伤效果，为克服肿瘤异质性提供了新方案。

　　

亮点

■ 基于截短型轻链铁蛋白（FTLsh）构建新型双特异性靶向蛋白

■ 融合蛋白可同时结合HER2与EpCAM受体

■ 蛋白-药物复合物以二聚体形式为主

■ 体外实验证实特异性细胞结合、内化及受体密度依赖性杀伤效应

■ 体内实验显示靶向聚集于肿瘤组织并显著抑制肿瘤生长

基因克隆

从K562细胞cDNA文库中通过特异性引物（补充材料S1）扩增获得人源截短型铁蛋白轻链基因（缺失C端34个氨基酸，FTLsh）。PCR产物经BamHI/HindIII（NEB）酶切后，克隆至同酶切处理的pET-24b载体。该载体骨架经改造：NdeI与BamHI位点间的T7标签序列被替换为GS序列。

DARP_9-29-FTLsh-EC1的构建与表征

为构建DARP_9-29-FTLsh-EC1（图2A），首先按材料与方法所述完成基因构建，并于E. coli Rosetta细胞中表达融合蛋白。

从可溶组分中纯化获得DARP_9-29-FTLsh-EC1，并通过天然电泳、SDS-PAGE及动态光散射（DLS）进行分析。SDS-PAGE结果显示约54 kDa条带（图2B泳道1），与单体理论分子量（53.5 kDa）相符。天然电泳结果表明……

讨论

因基因组不稳定性，实体瘤表现出高度异质性的肿瘤相关抗原表达，这对靶向治疗提出重大挑战。同时靶向肿瘤细胞过度表达的两种分子受体是突破该瓶颈、提升疗效的有效策略。

研究显示HER2与EpCAM在乳腺癌与卵巢癌细胞系中共表达[7]，有望成为双靶向治疗的理想靶点组合。