老年与成人恶性黑色素瘤体细胞基因变异谱的临床意义及分子特征研究

本综述深入探讨了老年与成人恶性黑色素瘤（MM）患者的体细胞基因变异特征，通过靶向二代测序（NGS）技术分析142个基因，揭示了BRAF V600E、NRAS、NF1等关键突变在年龄组间的差异分布。研究强调老年患者更易出现转移及特定基因变异（如KIT、KRAS），为个体化治疗及医疗政策制定提供重要分子依据，同时填补了土耳其地区该领域的研究空白。

　　

引言

恶性黑色素瘤（Malignant Melanoma, MM）虽仅占皮肤癌的2%，但因预后差、发病率及死亡率持续上升而备受关注。其主要源于皮肤黑色素细胞，亦可发生于黏膜、脑膜、眼及内脏器官。2024年全球预估新发MM病例达100,640例，死亡8,290例。环境与遗传因素共同参与MM发生，主要风险包括浅色皮肤、紫外线暴露、CDKN2A胚系突变、多发性痣及既往病史。分子机制上，CDKN2A/CDK4/RB和BAP-1通路受胚系突变影响，而体细胞突变以BRAF基因点突变最为常见（约50%病例），其中V600E突变（由1796T>A导致）占80%。值得注意的是，40%以上MM患者为65岁以上老年人，其临床特征常表现为更晚分期、更大Breslow厚度、更高溃疡率及有丝分裂指数，且年龄本身为独立不良预后因素。尽管年轻患者死亡率近年有所改善，老年群体却无显著变化，提示其生物学及分子profile可能存在差异。

材料与方法

研究经机构伦理委员会批准（协议号223，2023年12月7日），遵循赫尔辛基宣言。纳入2019年1月至2023年11月间转诊至分子病理实验室的103例成人MM患者，排除诊断不明者。按年龄分为老年组（≥65岁）和成人组（<65岁）。样本为福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织，经两名病理学家独立复核H&E切片确认诊断及肿瘤含量（>50%）。DNA提取使用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit，质量通过NanoDrop检测（A260/280=1.8–2.0）。采用QIAseq Expanded Cancer NGS Panel（142基因）进行靶向测序，覆盖所有外显子及5 bp内含子区域，平均测序深度500X。数据分析依托NextSeq软件及QCI、Ingenuity双平台，变异经IGV 2.8.2视觉验证，并按AMP/CAP/ASCO/ACMG指南分类。统计使用卡方、Fisher精确检验、t检验及ANOVA，p<0.05视为显著。

结果

103例患者中男性58例（56.31%）、女性45例（43.69%），平均年龄63.30±5.89岁，老年组55例、成人组48例。常见转移部位包括淋巴结、软组织和脑。老年组淋巴结转移率10.91%、软组织9.09%、肝7.27%、脑3.64%；成人组分别为25%、6.25%、4.17%和8.33%。老年组转移更频发，但组间器官转移无显著差异（p>0.05）。

基因panel显示61.17%患者（63例）存在48种致病变异，38.83%未检出。总体最常见为BRAF（33.98%）、NRAS（9.71%）、PTEN与NF1（各8.74%）、BRCA2（4.85%）、KIT与KRAS（各3.88%）、CDKN2A与TP53（各2.91%）。年龄对比揭示：老年组BRAF V600E为14.55%、V600K为7.27%，NRAS 10.90%、NF1 9.09%、KIT与KRAS各5.45%、CDKN2A 3.64%、PTEN 3.63%；成人组BRAF V600E高达39.58%、V600K 8.33%，NRAS 14.58%、NF1/PTEN/BRCA2各8.33%、TP53 4.17%。统计证实BRAF V600E（p=0.02）与BRCA2（p=0.05）在成人组显著富集，其余变异无年龄偏好。

讨论

年龄是MM重要预后指标，本研究验证老年患者更多转移及变异，与不良预后一致。BRAF突变（尤V600E）主导MAPK通路激活，多见于年轻患者和间歇性日照区域，与本组成人组高发一致。NRAS突变（9.71%）预期常见于老年及慢性UV暴露者，但本组反在成人组更高，提示人群差异。NF1突变（8.74%）作为RAS-MAPK负调控因子失活，是第三常见驱动变异，与文献（12–18%）及脱塑型亚型高发（45–93%）吻合。PTEN突变（8.74%）多与BRAF共现，通过肿瘤微环境抑制促进免疫逃逸，老年组此趋势明显。其他如KIT（3.88%）、CDKN2A（2.91%）在老年转移患者中高发，TP53（2.91%）突变率低于WES报告（19%），其意义待深究。KRAS（3.98%）与文献（~2%）一致且老年偏好。BRCA2体细胞突变（4.85%）首次提示其可能参与MM发病。

原发性部位（日照损伤皮肤、非日照区、肢端、黏膜等）是突变谱的重要混杂因素，但本研究缺乏位点详细信息，限制年龄与分子特征的因果解读。结果与TCGA（BRAF 50%、NRAS 30%、NF1 12–23%、PTEN 5–40%）及Hodis等研究趋势一致，仅频率略低。老年组NRAS、KIT、KRAS、CDKN2A、PTEN高发，而成人组BRAF V600E/V600K主导，这对靶向及免疫治疗选择具指导价值。

本研究优势涵盖临床重点人群、大panel NGS应用及土耳其首份年龄分层数据，但样本量小、原发位点信息缺失及混合原发/转移样本为局限。需多中心大样本进一步验证。

结论

勾勒老年MM体细胞变异分布对医疗政策发展至关重要。本研究首次报道土耳其数据，揭示BRAF V600E及BRCA2在成人组显著高发，而老年组呈现NRAS、KIT、KRAS、CDKN2A及PTEN优势谱。这些年龄相关分子差异为个体化治疗及预后评估提供依据，强调分子分型在老年肿瘤学中的核心地位。