硫酸葡聚糖通过调控M2型肿瘤相关巨噬细胞极化抑制胃癌细胞侵袭迁移及PD-L1表达的研究

本研究揭示硫酸葡聚糖（DS）通过抑制M0巨噬细胞向M2型肿瘤相关巨噬细胞（M2-TAM）极化，进而下调胃癌细胞（HGCCs）程序性死亡配体1（PD-L1）表达，抑制细胞增殖、侵袭迁移并促进凋亡。体内实验证实DS可减少裸鼠腹膜移植瘤结节数量及体积，临床样本分析显示CD163与PD-L1表达呈正相关（p<0.01）。该研究为胃癌腹膜转移的靶向治疗提供了新策略。

　　

引言

胃癌是全球致死率最高的肿瘤之一，早期诊断困难且手术机会有限。超过半数患者死于腹膜转移，其进程与肿瘤微环境（TME）密切相关。肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）是TME中的关键组分，其中M2型TAMs（M2-TAMs）占比越高，预后越差。程序性死亡配体1（PD-L1）通过结合T细胞PD-1受体介导免疫逃逸，而TAMs数量与肿瘤细胞PD-L1表达呈负相关。硫酸葡聚糖（DS）作为大分子物质（分子量500,000 Da），具有腹腔吸收慢、安全性高等优势，但其作用机制尚不明确。本研究旨在探索DS是否通过调控M0向M2巨噬细胞极化，间接影响胃癌细胞PD-L1表达及恶性生物学行为。

材料与方法

使用人单核细胞系THP-1经PMA诱导为M0巨噬细胞后，通过IL-4/IL-13极化至M2表型，并加入DS干预。通过细胞形态学、免疫荧光和Western blot检测M2标志物CD163表达。以人胃癌细胞系AGS和HGC-27为模型，通过Transwell侵袭实验、划痕实验、克隆形成实验、流式细胞术及qRT-PCR等技术评估DS对细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及PD-L1表达的影响。建立裸鼠腹膜转移模型，腹腔注射DS后观察肿瘤结节数量、大小及组织CD163表达。临床样本采用免疫组化与免疫荧光分析CD163和PD-L1相关性。

结果

M2巨噬细胞极化验证

DS显著抑制IL-4/IL-13诱导的M0向M2极化，表现为细胞伪足减少、CD163蛋白表达下降（Western blot验证）。免疫荧光显示M2组CD163绿色荧光强度显著高于DS干预组。

DS通过M2-TAMs调控胃癌细胞增殖与凋亡

克隆形成实验显示DS组AGS和HGC-27细胞集落数量减少，而M2共培养可促进集落形成，DS能逆转M2的促增殖作用。PCNA免疫荧光强度在DS组降低，M2组升高，DS+M2组介于两者之间。流式细胞术表明DS组凋亡率升高，M2组凋亡受抑，DS可拮抗M2的抗凋亡效应。Western blot显示DS组促凋亡蛋白Bax上调、抗凋亡蛋白Bcl-2下调，M2作用相反。

DS抑制胃癌细胞侵袭迁移

Transwell实验显示DS组穿透膜细胞数减少，M2共培养后侵袭能力增强，DS可抑制M2的促侵袭作用。划痕实验证实DS延缓细胞迁移速度，M2则加速迁移。上皮-间质转化（EMT）标志物检测显示DS组E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达升高，N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（vimentin）降低，M2作用相反。

DS下调PD-L1表达

免疫荧光与Western blot均显示DS组PD-L1蛋白表达降低，M2共培养后PD-L1上调，DS能阻断M2的PD-L1诱导作用。qRT-PCR进一步证实DS对PD-L1 mRNA表达的抑制效应。

体内实验验证

裸鼠模型中，DS组腹膜转移结节数量和体积显著小于对照组。免疫组化显示DS组肝组织及大网膜转移灶中CD163阳性细胞数减少，表明DS通过抑制M2-TAMs形成抑制肿瘤腹膜转移。

临床样本相关性分析

46例胃癌组织检测发现，低分化腺癌中CD163表达高于高分化腺癌及癌旁组织。双标免疫荧光显示PD-L1（红色）定位于肿瘤实质，CD163（绿色）分布于肿瘤间质，两者表达呈正相关（p<0.01，R²=0.1613），提示M2-TAMs浸润与PD-L1表达密切相关。

讨论

DS通过干扰M2极化关键细胞因子（如IL-6、IL-10、TGF-β）或单核细胞集落刺激因子信号通路，阻断M2-TAMs形成。M2-TAMs通过上调PD-L1促进免疫逃逸，并增强胃癌细胞增殖、侵袭迁移及抗凋亡能力，而DS可逆转上述效应。临床数据表明M2-TAMs浸润与胃癌恶性程度正相关，支持DS靶向TAMs的治疗潜力。本研究为DS作为胃癌腹膜转移的免疫代谢调节剂提供了理论依据，但其具体分子通路及在原发性巨噬细胞中的验证需进一步探索。

结论

DS通过抑制M0向M2巨噬细胞极化，减少M2-TAMs数量，进而下调PD-L1表达、抑制胃癌细胞恶性表型。该机制为胃癌免疫治疗提供了新靶点，DS有望成为腹腔给药防治胃癌转移的候选药物。