CRISPR/Cas9介导GDF9基因编辑对山羊颗粒细胞受体信号及FGF2应答的调控机制研究

本研究针对GDF9基因在山羊繁殖性能调控中的关键作用，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建GDF9敲除的颗粒细胞模型，系统解析了GDF9缺失对BMPR-1A/B/II等受体表达及FGF2应答的调控网络，发现GDF9与FGF2协同促进StAR表达并调控细胞增殖/凋亡相关基因，为山羊生殖功能精准调控提供了新靶点。

　　

通过CRISPR/Cas9基因编辑技术（包含单向导RNA^sgRNA和Cas9内切酶）特异性敲除山羊颗粒细胞中的GDF9基因，经T7内切酶I^T7E1验证敲除成功后，发现GDF9缺失显著影响其受体BMPR-1A、BMPR-1B和BMPR-II的表达水平。在野生型细胞中，成纤维细胞生长因子2^FGF2可上调BMPR-1A/B/II的mRNA表达，同时促进卵泡刺激素受体^FSHR表达而抑制黄体生成素受体^LHR；但GDF9敲除细胞中FSHR和LHR表达均升高。GDF9与FGF2协同增强类固醇生成关键基因StAR的表达，并下调凋亡标志物CASPASE 3、上调增殖标志物PCNA。该研究揭示了GDF9通过调控受体信号通路影响颗粒细胞功能的新机制，为山羊生殖性能改良提供理论依据。