CRISPR/Cas与LAMP联用技术：田间快速检测Digitaria ciliaris var. chrysoblephara杂合除草剂抗性的新方法

本研究针对Digitaria ciliaris var. chrysoblephara对ACCase抑制剂类除草剂cyhalofop-butyl的抗性检测难题，开发了基于CRISPR/Cas识别与LAMP扩增的OpCas-LAMP一锅法检测技术。该方法可在65°C条件下60分钟内精准区分W2027C/S位点的纯合突变（HM）、杂合突变（HT）及野生型（WT），灵敏度达1%杂合突变体，为全球杂草抗性治理提供了可现场应用的快速分子检测方案。

　　

背景：马唐属植物Digitaria ciliaris var. chrysoblephara对乙酰辅酶A羧化酶（ACCase）抑制剂类除草剂cyhalofop-butyl的抗性主要由W2027C或W2027S位点突变引起，但现有检测方法性能不足且难以实现田间集成化检测。

结果：研究人员开发了基于CRISPR/Cas系统与环介导等温扩增（LAMP）技术联用的OpCas-LAMP一锅法检测体系。通过特异性CRISPR/Cas向导RNA（gRNA）和LAMP引物设计，该方法可精准识别1%杂合突变水平的W2027S/C突变，在65°C条件下经30分钟CRISPR/Cas预切割和30分钟LAMP扩增，即可有效区分纯合突变体（HM）、杂合突变体（HT）与野生型（WT）。

结论：该技术可与微型检测设备集成实现田间实时一体化检测，显著提升其在杂草抗性监测与管理中的实用性和推广潜力，为全球除草剂抗性治理提供了创新技术路径。（注：文末利益冲突声明显示作者无相关竞争利益）