基于自上而下热蛋白质组分析（TD-TPP）的完整蛋白质形态功能表征研究

来自国际前沿的研究团队开发了一种新型自上而下热蛋白质组分析（TD-TPP）方法，用于在复杂样本中直接研究完整蛋白质形态（proteoform）的热稳定性。该方法成功实现了对β-乳球蛋白亚型及配体结合诱导的蛋白质稳定性变化的精准探测，并在大肠杆菌裂解液体系中验证了其高通量应用潜力，为功能蛋白质组学研究提供了突破性技术平台。

　　

通过热蛋白质组分析（Thermal Proteome Profiling, TPP）技术，研究人员能够解析蛋白质在温度梯度下的热稳定性变化，从而揭示其功能特性。传统TPP依赖自下而上（bottom-up）策略，需酶解蛋白质，导致完整蛋白质形态（proteoform）的结构信息丢失。本研究创新性地建立了自上而下（Top-Down, TD）TPP平台，结合非标记定量分析流程，直接表征完整蛋白质形态的热稳定性。

研究团队以β-乳球蛋白A（β-lactoglobulin A, βLG-A）和B（βLG-B）为标准蛋白进行基准测试，发现因两个氨基酸替换，βLG-A表现出略高于βLG-B的热稳定性。此外，利用碳酸酐酶（carbonic anhydrase）及其抑制剂乙酰唑胺（acetazolamide）的模型验证，该平台成功检测到配体结合引发的蛋白质稳定化效应。

研究进一步将TD-TPP应用于大肠杆菌（E. coli）裂解液的高通量分析，成功对163个蛋白质形态（包括72个已鉴定类型和91个特征组）进行热稳定性表征。结果表明，其熔解温度与自下而上TPP数据高度一致，证明该平台在复杂生物样本中具有可靠性和应用价值。这一技术为在完整蛋白质层面研究功能调控机制提供了强大工具。