基于分析型疏水相互作用色谱与LC-MS联用技术的CHO宿主细胞蛋白表面疏水性分析

本研究首次将分析型疏水相互作用色谱（HIC）与液相色谱-质谱联用（LC-MS）相结合，系统评估了中国仓鼠卵巢（CHO）细胞培养物中宿主细胞蛋白（HCP）的表面疏水性。研究揭示了GRAVY评分在预测蛋白疏水性方面的局限性，并证实基于AlphaFold三维结构计算的残基可及性及最大疏水斑块面积是更有效的评估指标，为复杂蛋白混合物的疏水性表征及下游纯化工艺开发提供了新见解。

　　

研究亮点

本研究首次广泛利用分析型疏水相互作用色谱（HIC）结合质谱（LC-MS）来探究中国仓鼠卵巢（CHO-S）宿主细胞蛋白（HCP）的表面疏水性。LC-MS成功鉴定并定量了HIC洗脱组分中的197种HCP，使得我们能够从单一HCP样品中评估每种蛋白的HIC洗脱时间。针对不同HCP样品测得的洗脱时间通常具有良好的重复性，表明该方法可靠。

结论

本研究为首次尝试广泛考察CHO-S宿主细胞蛋白（HCP）表面疏水性的工作，所采用的方法是分析型疏水相互作用色谱（HIC）与质谱（LC-MS）联用。LC-MS鉴定出197种可在HIC洗脱组分中定量的HCP，从而能够评估来自单一HCP样品的每种蛋白的HIC洗脱时间。针对不同HCP样品测得的洗脱时间通常具有重复性，这为后续分析奠定了基础。