基于多重实时PCR技术的意大利面中普通小麦定量检测方法内部验证研究

本文推荐一种经内部验证的多重实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）方法，通过特异性引物和探针靶向Pinb-D1和TaHd1基因区域，可精准检测意大利面中普通小麦掺假。研究创新性地引入基因组特异性C值转化因子，解决了DNA拷贝数向重量百分比（w/w）的换算难题。该方法经验证符合准确度与精密度统计要求，适用于食品检测实验室的常规应用，为保障面制品质量安全提供了可靠技术支撑。

　　

亮点

材料与样品制备

经过认证的硬质小麦和普通小麦纯籽粒由土耳其共和国农业林业部下属的大田作物中央研究所提供。整个验证过程的参考材料是通过使用配备不锈钢刀片的高速实验室搅拌机（Waring 8011, Commercial, USA）研磨普通小麦和硬质小麦籽粒获得的面粉制备的，未进行任何过筛步骤。通过设置1.5%、3.0%...

特异性

开发的双plex检测方法的特异性通过使用Pinb-D1（FAM）和TaHd1（HEX）靶标测试从各种谷物、豆类和小麦物种中提取的DNA进行评估。该筛选的结果总结在表4中。

在测试的物种中，T. compactum（密穗小麦）、T. monococcum（单粒小麦）和T. spelta（斯佩尔特小麦）对Pinb-D1检测呈阳性结果，表明与T. aestivum以外的其他小麦物种存在交叉反应。此外，TaHd1检测...

讨论

作为全球最常见的食品之一，意大利面在全球食品工业中占有重要份额。意大利面的年产量约为1500万吨。已经明确证明，使用T. durum作为原料可以获得更高质量的意大利面。然而，在从收获到储存、碾磨和运输的意大利面生产链中，意外的普通小麦污染是可能发生的。在意大利，法规已声明...

结论

在实施新方法时，实验室必须在使用前进行验证或确认。我们在此验证了一种可供所有常规食品控制实验室采用和应用的分析方法。本研究的新颖性源于其使用Pinb-D1和TaHd1靶标的双plex设计，以及整合了用于w/w定量的转化因子，这在像意大利面这样的复杂基质中尚未经过验证。这种双标记...