基于LC-MS/MS的新型蛋白质组学方法的开发与验证：用于定量视黄醇结合蛋白4（RBP4）和转甲状腺素蛋白（TTR）

《Journal of Radiology Nursing》：Development and Validation of a Novel LC-MS/MS-Based Proteomics Method for Quantitation of Retinol Binding Protein 4 (RBP4) and Transthyretin (TTR)

本研究开发液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法同步绝对定量血清/血浆中视黄醇结合蛋白4（RBP4）和甲状腺视蛋白（TTR），解决传统免疫分析法的不足。通过优化线性范围（RBP4:0.5–6 μM；TTR:5.8–69 μM）和基质效应评估，验证方法日内变异<12%、日间变异<5%，与商用ELISA相关性良好。该技术为循环蛋白复合物定量及生物标志物研究提供新工具。

　　

Aprajita S. Yadav | Katya B. Rubinow | Alex Zelter | Aurora K. Authement | Bryan R. Kestenbaum | John K. Amory | Nina Isoherranen

药学院药剂学系，华盛顿大学，7284号，西雅图，华盛顿州98195，美国

视黄醇结合蛋白4（RBP4）是循环中的视黄醇载体，可与转甲状腺素（TTR）结合，可能作为心血管代谢疾病的生物标志物。然而，RBP4的定量目前依赖于免疫测定和Western blot方法，但这些方法无法同时测量视黄醇和TTR的浓度。开发了一种液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法，能够同时绝对定量循环中的RBP4和TTR，这对于确定它们的生物标志物潜力至关重要。选择了在LC-MS/MS检测中具有可重复线性响应的替代肽作为分析对象；纯化的蛋白质被用作定量标准品，而重标记的肽则作为内标。该方法的有效性经过了验证，并应用于健康个体和糖尿病肾病患者中RBP4及TTR浓度的测定。在临床相关浓度范围内（RBP4：0.5–6 μM；TTR：5.8–69 μM），定量结果呈线性关系。检测方法的日间变异性小于12%，精度在5%以内；个体间的RBP4和TTR浓度变异性为18–26%，而个体内的变异性与检测方法的变异性相当。该方法所得结果与市售的酶联免疫测定（ELISA）结果具有良好相关性。所开发的LC-MS/MS方法能够实现血清和血浆中RBP4和TTR的同时绝对定量，适用于临床生物标志物研究以及循环中RBP4、TTR和视黄醇的化学计量学测定。