《Journal of Radiology Nursing》：Linker H1 Histone Direct Top-Down Proteoform Analysis
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组蛋白H1的翻译后修饰通过离子迁移质谱-紫外光解离-高分辨质谱联用技术直接鉴定，发现4种H1变体（H1.2, H1.3, H1.5, H1.4V），其中H1.4V为de novo测序首次确认，并检测到甲基化、乙酰化、磷酸化等修饰，方法具有样本需求少、多修饰检测优势。
Md Shofiul Alam | Cassandra N. Fuller | Kevin Jeanne Dit Fouque | Lilian Valadares Tose | Marissa A. Carter | Richard M. Searfoss | Francisca N. de Luna Vitorino | Mariangela Kosmopoulou | Detlev Suckau | Mark E. Ridgeway | Steven L. Van Orden | Benjamin A. Garcia | Francisco Fernandez-Lima
化学与生物化学系，佛罗里达国际大学，5450号，迈阿密，佛罗里达州33199，美国
连接蛋白H1组蛋白极易受到多种翻译后修饰（PTMs）的影响，这些修饰在染色质动态和基因表达中起着关键作用。在本研究中，通过串联使用捕获离子迁移谱技术（trapped ion mobility spectrometry）与紫外光解（ultraviolet photodissociation）相结合，随后通过傅里叶变换离子回旋质谱仪（Fourier Transform Ion Cyclotron Mass Spectrometer，简称TIMS）进行超高分辨率质谱测量，实现了对连接蛋白H1组蛋白蛋白异构体的直接表征。该方法利用了核心组蛋白和连接蛋白蛋白异构体在紫外光解前各自的迁移特性和质量差异，从而在傅里叶变换离子回旋质谱中实现对碎片离子的高精度质量检测，从而有效分配翻译后修饰类型。将该方法应用于牛组蛋白提取后，成功鉴定了四种H1组蛋白变体（H1.2、H1.3、H1.5和H1.4V）及其翻译后修饰分布，序列覆盖率高达60%；其中H1.4V变体的序列是通过从头测序方法获得的。所有报道的H1组蛋白蛋白异构体及其翻译后修饰（如单甲基化/二甲基化、乙酰化和磷酸化）均通过结合电子激活解离技术的顶向下液相色谱-串联质谱（LC-q-EAD-ToF MS/MS）和自下而上的分析方法得到了验证。这种直接分析方法由于样品制备过程简单且能观察到大量蛋白异构体的翻译后修饰类型，因此在全局H1组蛋白蛋白异构体分析中具有巨大潜力。
