《Journal of Thrombosis and Haemostasis》：Standardization of scanning electron microscopy analysis of fibrin fiber diameter measurement: Communication from the ISTH SSC Subcommittee on FXIII and Fibrinogen
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本研究旨在建立标准化血纤维蛋白血浆凝块制备流程以减少扫描电镜（SEM）纤维直径测量的差异性。通过8个实验室验证，比较了六甲基二硅氮烷（HMDS）干燥与临界点干燥（CPD）方法，发现HMDS组纤维直径中位数110±13 nm（CV=12%），CPD组99±7 nm（CV=7%），表面与内部纤维直径差异不显著，手动与自动测量结果一致。该标准流程为健康个体血浆凝块SEM分析提供了可靠参考。
参与人员：Can Cai、Zelda De Lange-Loots、Stephen R. Baker、Rustem I. Litvinov、Albe C. Swanepoel、Chandrasekaran Nagaswami、John W. Weisel、Rita Marchi、Alessandro Casini、Marguerite Neerman-Arbez、Cedric Duval、Robert A.S. Ariens、Rebecca A. Risman、Valerie Tutwiler、Heather A. Belcher、Aravind Elangovan、Nathan E. Hudson、Anetta Undas、Micha? Z?bczyk、Martin Guthold、Marlien Pieters
美国温斯顿-塞勒姆市维克森林大学物理系
摘要
背景
纤维蛋白凝块的微观结构（如纤维长度和直径、网络纤维密度以及孔径）与机械性能、渗透性、溶解敏感性及疾病状态密切相关。目前，这些性质通常通过扫描电子显微镜（SEM）进行检测，但尚缺乏用于测定纤维直径的标准化SEM样品制备方案。这导致关于健康个体的研究结果存在较大差异，阻碍了实验室间的数据比较。
目的
制定一种标准化的血浆凝块制备方案，以便进行SEM分析并测定纤维蛋白纤维的直径。
方法
采用广泛可获得的材料，并确保纤维蛋白原浓度和摩尔浓度与正常人血液相匹配，建立了一套标准化的样品制备方案。该方案连同其他内部使用的方案，由全球八个实验室进行了重复测试和验证。测试内容包括使用六甲基二硅氮烷（HMDS）与临界点干燥（CPD）对样品进行空气干燥的处理方法比较，以及对凝块表面和内部的纤维直径进行测量；同时对比了手动测量与自动测量方法的准确性。
结果
各实验室报告的纤维直径值具有良好的一致性，平均中位直径分别为110 ± 13 nm（HMDS干燥法）和99 ± 7 nm（CPD干燥法），变异系数（CV）分别为12%和7%。表面纤维与内部纤维的直径差异很小，几乎可以忽略不计。手动测量与自动测量结果也显示出合理的一致性。
结论
建议将这套标准化方案作为制备健康个体血浆凝块以供SEM分析的参考标准。
