热量限制时机与持续时间对小鼠卵巢衰老的影响：长期干预揭示生殖寿命保护新机制

本研究针对热量限制(CR)在卵巢衰老中的时效性问题，通过系统设计不同起始时间和持续周期的30% CR干预方案，发现长期CR能显著维持卵巢原始卵泡储备，而短期CR效果有限。研究人员采用四种喂养模式（AL、CR/CR、CR/AL、AL/CR），揭示CR对卵巢微环境（胶原沉积、巨噬细胞浸润）的改善作用具有起始年龄依赖性，为生殖衰老干预策略提供了关键时序证据。

　　

随着女性生育年龄的推迟，卵巢衰老已成为生殖医学领域的重要挑战。卵巢储备的不可逆性下降、卵泡质量降低以及伴随的炎症微环境改变，共同构成了生殖衰老的核心病理特征。在探索延缓卵巢衰老的干预策略中，热量限制(Caloric Restriction, CR)作为一种能够延长多种物种寿命的干预方式，其对生殖系统的影响逐渐受到关注。然而，CR干预的启动时机和持续时间如何影响卵巢衰老进程，此前尚未有系统研究。

在这项发表于《npj Aging》的研究中，Juliane B. Prosczek等研究者设计了精巧的实验方案，旨在阐明CR干预的时间窗口效应。研究团队将雌性C57BL/6小鼠分为四组：自由进食(AL)对照组、长期CR组（3-11月龄；CR/CR）、早期短期CR组（3-7月龄；CR/AL）和晚期短期CR组（7-11月龄；AL/CR）。通过长达8个月的观察期，系统评估了CR对不同阶段卵巢衰老标志物的影响。

研究方法上，作者主要运用了胰岛素耐受试验(Insulin Tolerance Test, ITT)评估代谢功能，阴道细胞学涂片分析动情周期，组织学切片进行卵泡计数分类，皮克 Sirius红(Picrosirius Red)染色量化胶原沉积，以及免疫荧光技术检测CD68⁺巨噬细胞浸润和γH2AX焦点（DNA损伤标志物）。

身体质量、肥胖度和胰岛素敏感性

长期CR组(CR/CR)体重增长显著受限，整体实验期间平均体重降低5.0%，而AL组体重增加16.7%。CR/CR组腹腔脂肪组织比例最低，胰岛素敏感性最高，葡萄糖清除率几乎是AL组的两倍。短期CR组在恢复自由进食后，代谢改善迅速逆转，表明CR的代谢益处具有依赖性。

卵巢卵泡数量

长期CR有效维持了原始卵泡池，CR/CR组原始卵泡数量显著高于AL组。值得注意的是，在7-11月龄期间，CR/CR组的原始卵泡储备几乎保持不变，而AL组则呈现急剧下降趋势。三级卵泡数量在CR/CR组也得到较好维持，但AL/CR组的三级卵泡数量严重受损。短期CR干预（无论早期还是晚期）均未能显著保护卵巢储备。

卵巢纤维化、炎症和DNA损伤

在7月龄时，CR/CR组卵巢胶原沉积低于同龄AL组，但到11月龄时，各组间胶原沉积无显著差异。巨噬细胞浸润在CR/CR组（7月和11月）和CR/AL组均较低，而AL/CR组与AL组无差异，提示早期启动CR对抑制卵巢炎症更为有效。各组间DNA损伤水平（γH2AX焦点）无统计学差异。

动情周期

长期CR组大部分时间处于动情间期，动情次数减少，表明CR抑制了排卵周期。这种抑制在恢复自由进食(CR/AL)后完全逆转，动情周期恢复正常，证明CR对生殖轴心的抑制是可逆的。

研究结论表明，长期热量限制是保护卵巢储备的必要条件，而短期干预无论启动早晚均不足以对抗年龄相关的卵泡耗竭。CR对卵巢微环境（胶原重构、炎症抑制）的改善作用存在关键时间窗口，早期启动干预获益更显著。尽管CR有效保存了卵泡池，但同时也抑制了排卵功能，这种生殖长寿的"权衡"机制提示CR可能通过中枢性抑制下丘脑-垂体-卵巢轴发挥作用。该研究为开发基于代谢干预的生殖保鲜策略提供了重要的时序生物学依据，提示未来在临床转化中需充分考虑干预时机与持续时间的关键作用。