一种广谱HVT载体疫苗在预防禽传染性法氏囊病方面的安全性和免疫原性

《Poultry Science》：Safety and immunogenicity of a broad-spectrum HVT vector vaccine for avian infectious bursal disease

本研究构建了共表达非常毒株（vvIBDV）和新型变种（nVarIBDV）VP2抗原的重组HVT疫苗（HVT-2VP2），通过Red/ET重组和Flp介导的位点特异性重组技术整合双VP2基因至HVT基因组。实验证实该疫苗在15代细胞传代中保持遗传稳定性，表达VP2蛋白且病毒生长动力学与亲本HVT无显著差异。动物试验显示HVT-2VP2对vvIBDV、nVarIBDV和经典株（BC6/85）的保护率均超过92%，显著降低法氏囊萎缩和病理损伤，且无病毒排泄和致病性。该双抗原疫苗为解决IBDV多血清型流行提供了新策略。

　　本文探讨了一种新型的重组疫苗——HVT-2VP2，该疫苗基于火鸡疱疹病毒（HVT）构建，能够同时表达非常致病性（vvIBDV）和新型变异（nVarIBDV）禽传染性法氏囊病病毒（IBDV）的VP2抗原。研究背景指出，IBDV作为一种非包膜的双链RNA病毒，主要感染3至6周龄的鸡，导致法氏囊的广泛B细胞凋亡，从而引发严重的免疫抑制，增加鸡群对继发感染的易感性，并降低常规疫苗的有效性。现有的疫苗对新型变异株的保护效果有限，因此开发一种能够提供广泛保护的疫苗成为迫切需求。

HVT是一种非致病性α疱疹病毒，具有大基因组和良好的安全性，是疫苗开发的有前景的载体。通过基因工程技术，研究团队将来自vvIBDV和nVarIBDV的VP2基因插入到HVT基因组的非编码区域，构建了HVT-2VP2重组病毒。这种设计旨在利用HVT的免疫诱导能力，同时表达两种不同抗原，以增强疫苗的保护范围。实验中使用了Red/ET同源重组和Flp/FRT介导的切割技术，确保基因插入的稳定性和表达效率。

疫苗的制备过程包括将重组病毒在鸡胚成纤维细胞（CEF）中进行多次传代，以确认其遗传稳定性。通过PCR、序列分析、间接免疫荧光（IFA）和Western blot等方法验证了插入基因的表达情况。结果显示，HVT-2VP2在多次传代后仍能保持遗传稳定，并且在所有传代中都能稳定表达VP2蛋白。此外，病毒的生长动力学与亲本HVT相似，表明其在体外复制能力未受影响。

在安全性评估方面，研究团队使用了1日龄的无特定病原体（SPF）鸡进行实验。结果显示，HVT-2VP2不会引起任何临床症状、体重下降或病理病变。病毒DNA主要存在于血液和羽毛髓质中，而没有在呼吸道或粪便中检测到病毒释放，这表明该疫苗具有良好的安全性，不会引发水平传播。通过qPCR检测病毒在不同组织中的分布，发现病毒DNA在血液和羽毛髓质中含量较高，但在其他组织中未检测到显著的病理变化，进一步支持了其安全性。

在免疫保护效果方面，通过三个独立实验评估了HVT-2VP2对不同IBDV毒株的保护能力。结果表明，疫苗在针对nVarIBDV（Hb06v）、vvIBDV（HB2021-5）和经典IBDV（BC6/85）的挑战中均表现出显著的保护效果，保护率分别达到92.9%、92.3%和92.9%。接种疫苗的鸡只表现出轻微的法氏囊病变和保持良好的淋巴组织结构，而未接种的对照组则出现了严重的法氏囊萎缩和淋巴细胞减少。这些结果表明，HVT-2VP2能够有效诱导免疫应答，提供广泛的保护，减少IBDV引起的免疫抑制和经济损失。

进一步的免疫组织学分析显示，接种HVT-2VP2的鸡只在法氏囊中保持正常的淋巴结构和无明显炎症反应，而挑战组则出现了明显的病理变化，包括淋巴细胞减少、组织水肿和出血。这说明疫苗不仅能够预防疾病的发生，还能有效减轻疾病引起的组织损伤。

研究还指出，HVT-2VP2的双抗原策略可能在未来的疫苗开发中具有重要意义。这种策略能够同时覆盖多种IBDV毒株，提高疫苗的交叉保护能力。然而，研究也提到了一些潜在的局限性，例如需要在实际环境中进一步验证其有效性，特别是在存在母源抗体干扰的情况下。此外，还需要进一步研究疫苗的免疫持续时间和细胞免疫机制，以全面评估其在实际应用中的表现。

综上所述，HVT-2VP2作为一种新型的重组疫苗，展现了在对抗IBDV多样化威胁方面的潜力。其双抗原策略结合HVT载体的固有安全性和稳定性，为同时保护nVarIBDV、vvIBDV和经典毒株提供了可行的解决方案。未来的研究应重点探索疫苗在实际生产环境中的效果，并评估其长期的免疫持久性，以进一步验证其在实际应用中的价值。