Auranofin通过抑制NOTCH3信号通路增强卵巢癌铂类化疗敏感性的机制与临床前研究

本研究揭示FDA已批准的抗风湿药物Auranofin可作为NOTCH信号通路抑制剂，通过破坏转录因子RBPJ的DNA结合能力，显著增强铂类药物对NOTCH3高表达卵巢癌细胞的杀伤作用。在细胞系模型、异种移植模型及8例患者来源类器官模型中均证实，Auranofin不仅能提高铂敏感患者的化疗疗效，还能使部分铂耐药患者恢复敏感性。该研究为NOTCH通路异常激活的卵巢癌提供了新的联合治疗策略，具有重要临床转化价值。

　　

Auranofin与顺铂协同降低NOTCH依赖性卵巢癌肿瘤负荷的作用机制

NOTCH信号通路在细胞增殖、分化和干细胞维持中发挥关键调控作用。该通路的异常激活与癌症发生、进展及化疗耐药密切相关。在高级别浆液性卵巢癌中，NOTCH通路基因突变和扩增发生率高达22%，其中NOTCH3改变与患者不良预后显著相关。

卵巢癌细胞中NOTCH3激活状态决定Auranofin敏感性

研究人员首先检测了7种卵巢癌细胞系的NOTCH3蛋白表达水平，发现SKOV3细胞几乎不表达NOTCH3细胞内结构域，而OVCAR3、PEO1等细胞则呈现高表达。通过测定半数抑制浓度发现，NOTCH3低表达的SKOV3细胞对Auranofin的IC₅₀值最高，而NOTCH3高表达细胞系敏感性显著增强，差异达10倍以上。

NOTCH3是Auranofin细胞毒作用的关键介质

为验证NOTCH3在Auranofin作用机制中的核心地位，研究团队采用短发夹RNA技术敲低OVCAR3和SKOV3细胞中的NOTCH3表达。结果显示，在NOTCH3高表达的OVCAR3细胞中，NOTCH3敲低显著降低了Auranofin敏感性；而在原本NOTCH3低表达的SKOV3细胞中，敲低操作未引起敏感性显著变化。这一发现证实NOTCH3信号通路是Auranofin在卵巢癌细胞中的主要作用靶点。

Auranofin破坏RBPJ与NOTCH依赖性启动子的相互作用

通过染色质免疫沉淀实验，研究人员发现Auranofin能以剂量依赖方式降低RBPJ在NOTCH靶基因HES1和HES4启动子区域的富集，而对阴性对照基因CDKN1A无影响。这从分子水平证实了Auranofin通过干扰RBPJ-DNA相互作用抑制NOTCH信号通路的机制。

Auranofin与顺铂在OVCAR3细胞中展现协同效应

在NOTCH依赖性OVCAR3细胞中，Auranofin与顺铂联合处理表现出显著协同作用。应用Chou-Talalay中效方程计算联合指数显示，在所有效应水平均呈现CI值小于1的协同关系。这种协同作用在多种浓度组合中均得到验证。

Auranofin提高CDX小鼠模型中顺铂疗效

在OVCAR3异种移植模型中，Auranofin与低剂量顺铂联合治疗显著降低肿瘤负荷。特别值得注意的是，联合治疗组小鼠的生存期显著延长，且Auranofin单药治疗显示出持久的抗肿瘤效果。在采用高剂量Auranofin的改良方案中，双周给药策略进一步验证了联合治疗的优越性。

NOTCH3信号在HGSOC类器官模型中广泛激活

研究人员建立了8例高级别浆液性卵巢癌患者来源类器官模型，涵盖铂敏感、铂耐药和铂难治三种临床类型。Western blot分析显示所有模型均表达RBPJ和NOTCH3细胞内结构域，证实NOTCH3信号通路在HGSOC中普遍激活。值得注意的是，NICD3表达水平与临床铂敏感性无直接相关性。

Auranofin恢复铂耐药患者来源类器官的铂敏感性

在5例铂耐药/难治患者来源类器官中，Auranofin在PDO113和PDO2模型中成功恢复了铂类药物敏感性。联合用药显著增强了细胞杀伤效果，而单独使用顺铂几乎无效。然而，在PDO1、PDO80和PDXO9模型中未观察到类似增敏效应，提示铂耐药机制的异质性。

Auranofin增强铂敏感患者类器官的化疗效果

在3例铂敏感患者来源类器官中，Auranofin均展现出与顺铂的协同作用。尽管协同程度存在模型间差异，但所有模型都证实联合用药能提高化疗敏感性，为铂敏感卵巢癌患者的治疗优化提供了实验依据。

类器官中高NICD3表达与Auranofin IC₅₀负相关

数据分析显示，类器官中NICD3表达水平与Auranofin半数抑制浓度呈负相关趋势。高NICD3表达的类器官普遍表现出较低的IC₅₀值，进一步支持NOTCH3信号通路活性是预测Auranofin疗效的重要生物标志物。

讨论与展望

本研究系统阐述了Auranofin作为NOTCH通路抑制剂在卵巢癌治疗中的应用潜力。值得注意的是，Auranofin在联合治疗中展现出降低顺铂毒性的独特优势，这为改善化疗耐受性提供了新思路。虽然目前研究主要聚焦顺铂，但考虑到卡铂与顺铂具有相似的耐药机制，Auranofin与卡铂的联合疗效值得进一步探索。

研究结果支持开展基于患者来源类器官的个体化药物敏感性测试，为精准医疗提供实验依据。特别值得注意的是，在铂耐药患者中观察到的40%应答率与既往NOTCH靶向治疗临床试验结果相符，提示Auranofin可能为这部分难治患者提供新的治疗选择。

综上所述，本研究不仅阐明了Auranofin通过抑制NOTCH3信号通路增强铂类化疗疗效的分子机制，还通过多模型验证了其临床转化潜力，为NOTCH通路异常激活的卵巢癌患者提供了新的治疗策略。