ITR区域通过新型鹅细小病毒反向遗传系统调控病毒致病性的机制研究

本文基于反向遗传学技术构建了新型鹅细小病毒（NGPV）感染性克隆，通过比较ITR（反向末端重复序列）区域差异的病毒株揭示了该区域在调控病毒致病性中的关键作用。研究为阐明NGPV致短喙侏儒综合征（SBDS）的分子机制提供了直接证据，并为疫苗研发和病原生物学研究提供了技术平台。

　　

Highlight

通过反向遗传操作技术成功构建并拯救了仅在基因组末端ITR区域存在差异的两个NGPV病毒株。致病性比较分析显示，两个拯救毒株表现出截然不同的毒力特征。该反向遗传操作系统为研究鹅细小病毒的分子生物学、疫苗开发、诊断、结构域功能和疾病发病机制提供了操作平台。

Section snippets

Virus and Animals

NGPV SD毒株于2014年从山东省聊城采集的肝脏样本中分离，保藏于本实验室。其基因序列已提交至NCBI GenBank（登录号：KY511124.1），并通过SPF鸭胚进行病毒扩增。60只新孵化的未免疫樱桃谷鸭购自河北永红鸭业有限公司。

Construct carrying a genetic marker full-length infectious clone plasmid

基于NGPV酶切位点分析...

Construction of the NGPV SD infectious clone

基于pOK12质粒载体构建NGPV株的全长感染性克隆，该载体经过工程化改造带有抗生素抗性标记和限制性酶切位点，成功构建了三个亚克隆（pOK-L、pOK-M和pOK-R）。病毒基因组的5'非翻译区（UTR）和3'UTR分别连接到修饰后的pOK-L和pOK-R载体。使用无缝克隆技术将NS和VP基因组片段无缝插入pOK-M质粒。这些质粒...

Discussion

反向遗传技术已成为研究病毒基因结构与功能、鉴定毒力决定簇、阐明跨种传播与致病机制、筛选抗病毒化合物以及开发新型高效疫苗的强大研究工具。

病毒序列的保真度与稳定性，特别是...

Conclusion

综上所述，本研究成功建立了高保真度的反向遗传系统并拯救了带有遗传标记的感染性NGPV。禽类感染试验表明，感染亲本SD毒株、拯救毒株rSD和rSDT的樱桃谷鸭雏均表现出典型的SBDS临床症状，且NGPV可在宿主体内长期维持持续性感染状态。实验数据进一步揭示，反向末端重复（ITR）序列的差异...