整合多组学揭示奶羊围产期瘫痪与脂质代谢紊乱的早期生物标志物

本研究通过整合多组学技术，揭示了奶羊围产期瘫痪（Paresis）与脂质代谢紊乱的密切关联，发现酰基肉碱（Acylcarnitines）等早期生物标志物及肠道菌群（如Fusobacterium和Faecalibacterium）的差异，为早期诊断和营养干预提供了新策略。

　　

摘要

围产期瘫痪是奶羊常见的代谢性疾病，但其发病机制复杂且尚未完全阐明。本研究通过对奶羊从产前21天到产后1天进行纵向监测，收集血液、粪便和初乳样本，结合血浆代谢组学和粪便16S rRNA测序，揭示了瘫痪的代谢通路，并识别出潜在的早期生物标志物。研究结果显示，健康奶羊（HDS）和瘫痪奶羊（PDS）在产前（尚未发病）和产后（发病）的生理参数均存在差异。元素分析发现，PDS初乳中的铜（Cu）、钾（K）和镁（Mg）水平高于HDS。代谢组学分析在产前HDS和PDS中鉴定出37种差异代谢物，其中酰基肉碱（如3-羟基十六碳二烯酰肉碱和3-羟基辛二酰肉碱）成为有前景的早期诊断生物标志物。16S rRNA测序揭示了不同的微生物特征，PDS中富集了Fusobacterium和Erysipelatoclostridium等菌属，而HDS中Faecalibacterium和Bacillus更为丰富。产后多组学数据整合显示，PDS与HDS在甘油磷脂代谢、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢以及初级胆汁酸生物合成等方面存在差异。研究结果表明，奶羊围产期瘫痪与脂质和氨基酸代谢异常有关，并识别出酰基肉碱等早期潜在生物标志物。本研究为通过靶向营养干预和疾病控制来预防和管理围产期瘫痪提供了关键见解。

引言

全球约85%的奶产量来自奶牛，而水牛、山羊、绵羊和骆驼奶分别占11%、2.3%、1.4%和0.2%。羊奶营养丰富，平均蛋白质含量为5.5 g/100 g，是牛奶的1.6倍，山羊奶的1.5倍；其脂肪含量平均为5.9%，分别是牛奶和山羊奶的1.8倍和1.6倍。因此，提高奶羊的育种、营养、饲养和管理实践，同时发展当地奶羊产业以满足日益增长的公众需求至关重要。

在围产期，代谢、生理状况和炎症状态的变化增加了对乳房炎、子宫炎和代谢性疾病等疾病的易感性。瘫痪可定义为“步态生成或支撑体重能力缺陷”，并意味着仍存在一定程度的自主运动。绵羊和山羊的产褥期瘫痪通常在妊娠最后几周以暴发形式发生，通常影响<5%的个体，严重情况下可达30%。奶羊瘫痪的主要原因包括钙磷失衡、妊娠毒血症、运动不足和其他疾病相关因素。妊娠毒血症是导致瘫痪的主要因素，预后不良，据报道奶山羊的病例死亡率高达86%。妊娠毒血症的核心代谢事件是脂肪动员和葡萄糖可用性，通常由妊娠后期能量负平衡（NEB）触发，此时胎儿生长的能量需求超过摄入能力。肥胖和久坐的妊娠反刍动物由于腹腔内脂肪和扩张的子宫导致瘤胃空间减少，进一步加剧了NEB。在低钙血症情况下，磷酸肌酸表达减少导致肌肉中三磷酸腺苷（ATP）产生减少，从而引起奶牛瘫痪。总之，瘫痪的发生与能量和脂肪代谢紊乱密切相关。

胃肠道是一个高度复杂的生态系统，饮食、微生物群和宿主组织之间的动态相互作用在塑造发育和生理健康方面起着基础性作用。越来越多的证据表明，肥胖和糖尿病等代谢紊乱与肠道微生物失调密切相关，后者改变了微生物的组成和功能。除了代谢作用外，肠道微生物群也是宿主免疫的关键调节器。它有助于免疫系统的成熟和稳态，而微生物扰动可能导致免疫失调和慢性炎症。尽管瘫痪作为一种代谢紊乱，与代谢和免疫功能破坏有关，但瘫痪奶羊（PDS）与健康奶羊（HDS）相比，其肠道微生物改变及其潜在的机制贡献仍然很大程度上未知。

血液代谢物是诊断动物疾病和监测代谢状态的有价值的生物标志物。畜牧代谢组学促进了不同物种疾病相关生物标志物的识别。例如，Hailemariam等人将肉碱、丙酰肉碱和溶血磷脂酰胆碱酰基C14:0确定为奶牛血浆生物标志物，能够在临床发病前4周预测疾病状态。同样，Uzti??mür和ünal报道，激素如spexin（下降56.1 pg/mL）和irisin（下降0.51 μg/mL）对妊娠毒血症表现出高敏感性、特异性和诊断性能，曲线下面积（AUC）值分别为0.988和0.979。简而言之，多代谢物组合在预测围产期疾病方面具有显著潜力。怀有双胎或三胎的妊娠母羊在妊娠最后一个月所需的能量分别比怀单胎的母羊高180%或240%。将东弗里生羊与湖羊杂交提高了对当地饲养条件的适应性，增强了泌乳效率，并产生了高繁殖力的杂交种，产羔率高达230%。然而，这也增加了它们对妊娠毒血症和随后瘫痪的易感性。因此，利用组学技术识别早期生物标志物并阐明与瘫痪相关的代谢通路至关重要。

鉴于与瘫痪相关的代谢变化，我们假设围产期特定的血液代谢物和微生物特征与瘫痪的发生有关。本研究旨在比较健康和瘫痪奶羊的血浆生理参数和血乳元素谱，揭示不同的代谢组学和微生物组特征，这可能有助于识别早期生物标志物并为未来的预防和管理策略提供信息。

材料与方法

动物、饮食和实验设计

实验在甘肃元盛农业科技有限公司元盛第一生态牧场进行。从11708只奶羊中选取了156只处于围产早期（约产前21天）的杂交奶羊（东弗里生公羊×湖羊母羊）。从围产早期到产后期，有122只母羊成功产羔，排除了死亡或未怀孕的情况。瘫痪定义为“步态生成或支撑体重能力缺陷”，同时保留部分自主运动。患病羊表现出特征性临床症状，包括步态僵硬、共济失调、流涎、便秘和肌肉震颤。诊断标准根据Crilly等人对围产期瘫痪的临床描述和视频记录建立。

其中，11只奶羊发生瘫痪，发病时间在产前3天至产后1天之间。我们从122只未使用抗生素或药物治疗的奶羊中选择了HDS（n = 11）和PDS（n = 11）。HDS选自与PDS病例在年龄、胎次和体重上匹配的非瘫痪个体。所有HDS均表现出正常的采食量、警觉的精神状态以及无神经/肌肉骨骼异常。两组在产前21天（尚未瘫痪）分别定义为APDS（产前瘫痪奶羊）和AHDS（产前健康奶羊）。在整个实验期间，所有奶羊均群养并在统一条件下管理，提供一致的饮食、水和环境因素。奶羊饲喂基础全混合日粮（TMR）。TMR通过自动饲喂车每天提供两次，以确保自由采食，时间约为上午7:00和下午6:00。

样本收集

在分娩前21天和分娩后1天上午7:00从颈静脉采集血液样本到EDTA真空采血管中。样本在4°C下以3000 × g离心15分钟，收集血浆。血浆样本在液氮中冷冻并保存在-80°C以备后续分析。在产后第1天早上喂食前，使用无菌手套从母羊直肠手动采集粪便样本。粪便样本转移到无菌5 mL冷冻管中，立即在液氮中淬灭，并保存在-80°C以备后续分析。初乳样本在产后第二天早上喂食后收集到50 mL离心管中，并保存在-20°C以备后续分析。

血浆参数测量

使用迈瑞BS-420自动生化分析仪通过比色法测量血浆参数。使用市售检测试剂盒检测总蛋白（TP）、血尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、葡萄糖（GLU）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、甘油三酯（TG）、胆碱酯酶（ChE）、白蛋白（ALB）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、肌酸激酶（CK）、碱性磷酸酶（ALP）和乳酸脱氢酶（LDH）的水平。使用检测试剂盒检测免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）。根据制造商说明书，使用市售检测试剂盒检测总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）的水平。

元素测定

血浆和初乳样本解冻后彻底混合。取1 mL样本加入微波消解罐，随后加入6 mL硝酸和2 mL过氧化氢。放置橡胶垫，静置30分钟，拧紧外盖。将样本放入微波消解仪中，消解温度因样本而异。血浆样本在12分钟内升温至180°C，保持10分钟。初乳样本在12分钟内升温至190°C，保持10分钟。消解后，使用赶酸器在160°C下赶酸。将消解液转移至50 mL容量瓶并用超纯水稀释。溶液通过0.22 μm膜过滤并保存在4°C待测。使用无机元素混合溶液标准物质制备钙（Ca）、铜（Cu）、铁（Fe）、钾（K）、镁（Mg）、钠（Na）和锌（Zn）的标准溶液。使用单元素标准溶液测定磷（P）。使用电感耦合等离子体光学发射光谱仪测定微量元素。

非靶向代谢组学

血浆样本在冰上解冻，使用80%甲醇缓冲液提取代谢物。简要来说，将100 μL样本转移到2.0 mL EP管中，加入400 μL冰甲醇溶液并充分混合。提取混合物在-20°C保存30分钟以沉淀蛋白质。在20,000 × g离心15分钟后，将400 μL上清液转移到新的EP管中。上清液再次离心后转移到进样瓶中进行超高效液相色谱-高分辨率质谱（UPLC-HRMS）分析。此外，将每个样本的15 μL提取物混合以创建质量控制样本。使用UltiMate 3000 UPLC系统进行色谱分离。使用Acquity UPLC T3柱进行分析。用于采集的高分辨率质谱仪是Q-Exactive。每个样本在正离子和负离子模式下进行分析。

使用XCMS软件套件对MS数据进行预处理，包括峰检测、聚类、保留时间对齐、二次聚类以及同位素和加合物注释。原始LC-MS数据文件首先转换为mzXML格式。使用KEGG和HMDB数据库通过比对样本的分子质量（m/z）数据与数据库条目来注释代谢物。如果实验值与数据库条目之间的质量差异在10 ppm以内，则认为注释成功。

使用R进行统计分析。使用metaX包进行正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）并使用ggplot2可视化。基于t检验（P < 0.05）和变量重要性投影（VIP）> 1识别差异代谢物。log₂FC > 0的代谢物被认为上调，log₂FC < 0的代谢物被认为下调。使用标准支持向量机模型进行分类，并构建受试者工作特征（ROC）曲线。使用AUC指标评估模型性能。基于超几何检验，进行KEGG通路的差异富集分析。P < 0.05的功能类别被认为在差异代谢物中显著富集。使用R包pheatmap绘制聚类热图。使用R包cor中的Pearson相关系数进行相关性分析。基于与代谢物相关的通路创建网络图。

16S扩增子测序

使用磁珠粪便基因组DNA提取试剂盒提取微生物群的总DNA。选择特异性引物（341F: 5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′ 和 805R: 5′-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3′），并根据反应体系添加PCR试剂以扩增16S rRNA基因V3-V4区片段。PCR程序包括初始变性98°C 30秒，随后进行32个循环的变性（98°C 10秒）、退火（54°C 30秒）、延伸（72°C 45秒）和最终延伸步骤（72°C 10分钟）。PCR产物通过AMPure XT磁珠纯化并通过Qubit定量。使用Agilent 2100生物分析仪和Illumina文库定量试剂盒评估纯化的PCR产物。之后，使用NovaSeq 6000测序仪进行2 × 250 bp双端测序。

原始测序数据在解复用后使用cutadapt进行引物切除。随后，使用FLASH合并双端读数。为了提高数据质量，使用fqtrim中的滑动窗口算法精炼质量分数低于20、长度短于100个碱基对或含有超过5%模糊“N”核苷酸的读数。后续的质量过滤确保了获得纯净标签。使用Vsearch消除嵌合序列。然后使用DADA2进行降噪和扩增子序列变异（ASV）的推导。对于物种注释，使用QIIME2中的feature-classifier插件进行序列比对，参考SILVA和NT-16S数据库。使用Chao 1、Shannon、Simpson和Ace指数评估Alpha多样性，并使用Wilcoxon秩和检验进行组间统计比较。使用Bray-Curtis相异度评估Beta多样性，并通过主坐标分析图可视化。Alpha和Beta多样性的评估以及基于相对丰度的细菌分类学确定均通过QIIME2执行。为了识别差异丰富的菌属，应用Mann-Whitney U检验，显著性设定为P值<0.05。使用nsegata-lefse包计算线性判别分析（LDA）效应大小（LEfSe；LDA ≥ 2.0，P < 0.05）。使用R语言创建其他图形表示。为了理解差异微生物相互作用，我们基于菌属的相对丰度构建了网络。使用R包Hmisc中的Spearman相关系数分析PDS和HDS内菌属相关性网络。使用Cytoscape版本3.8.2可视化不同菌属之间的显著相关性（|rho| > 0.70且调整后P < 0.05）。使用PICRUSt2从16S rRNA基因测序数据预测微生物群落的功能谱，并使用KEGG数据库进行注释。

统计分析

使用Prism的非配对t检验分析不同组奶羊的基本信息和初乳元素。此外，使用SAS的MIXED程序根据以下模型，采用双向方差分析设计分析血浆参数和血浆元素含量：

Y_ijk = μ + P_i + G_j + (PG)_ij + e_ijk

其中μ是总体均值；P_i是时期i的效应；G_j是组j的效应；(PG)_ij是时期i和组j的交互作用；e_ijk是随机误差。数据表示为均值和合并标准误。P < 0.05时声明具有统计学显著性，0.05 ≤ P ≤ 0.10时声明有趋势。

结果

奶羊母体及其后代信息

整个羊群的数据显示。实验中奶羊母体的平均年龄为39.30 ± 10.54个月，平均胎次为2.18 ± 1.00，平均产羔数为2.33 ± 0.94。母羊在妊娠0、30、60、90天和分娩后1天的平均体重分别为：87.63 ± 12.00 kg, 91.31 ± 13.14 kg, 96.61 ± 13.16 kg, 96.02 ± 12.80 kg, 和86.19 ± 12.78 kg。后代平均存活数为2.07 ± 1.04，死亡数为0.25 ± 0.62，平均存活率为89.21% ± 26.28%。存活后代的窝重为7.65 ± 3.32 kg，平均体重为3.74 ± 1.53 kg。

PDS和HDS在年龄、胎次和妊娠期间体重方面没有差异。HDS后代的存活数和存活率高于PDS。此外，HDS后代的窝重和平均体重高于PDS。PDS和HDS的产羔数没有差异，但HDS后代的死亡数低于PDS。

糖脂代谢、蛋白质代谢和肝功能

在糖脂代谢方面，产前PDS的GLU、TC、HDL和LDL水平低于HDS，而ChE有升高的趋势。产后，PDS的TG水平高于HDS。在蛋白质代谢方面，产前和产后HDS和PDS之间的血浆TP水平没有差异。产前，PDS的CREA水平高于HDS。产后，PDS的BUN水平高于HDS，而CREA有升高的趋势。在肝功能方面，产前和产后HDS和PDS之间的ALP水平没有差异。产前，HDS的ALB水平高于PDS。产后，PDS的ALT、AST、CK和LDH水平高于HDS，而TBIL有升高的趋势。

免疫指数和氧化应激状态

在全身免疫方面，HDS和PDS之间的IgA和IgM水平没有差异。产后，PDS的IgG水平高于HDS。在氧化应激方面，HDS和PDS之间的T-AOC、GSH-Px和MDA水平没有差异。产后，HDS的SOD水平高于PDS，而CAT水平有升高的趋势。

血浆和初乳中的元素含量

产前，PDS的血浆Fe水平低于HDS。产后，PDS的血浆Cu水平高于HDS。此外，PDS的血浆P、K和Zn水平与HDS相比有升高趋势。PDS初乳中的Cu、K和Mg水平高于HDS。

奶羊瘫痪早期生物标志物的识别

使用非靶向LC-MS/MS为基础的代谢组学在正负离子模式下评估产前期间的血浆代谢物谱。在去除两种电离模式下的杂质峰和重复离子后，共鉴定出1150种代谢物用于进一步分析。同时，我们使用聚类热图可视化相同代谢物在不同组中的表达水平。偏最小二乘判别分析（PLS-DA）表明APDS和AHDS组之间的血浆代谢物存在明显分离。通过200次置换验证验证了PLS-DA模型，确保没有发生过拟合。随后，基于VIP > 1和P < 0.05，鉴定出37种差异代谢物，与AHDS组相比，APDS组中有14种代谢物上调，23种代谢物下调。通过HMDB化合物分析对37种差异代谢物进行分类，显示它们分为四类：脂质和类脂分子、有机杂环化合物、有机酸及其衍生物、以及有机氧化合物。在上调或下调的代谢物中，脂质和类脂分子是主要类别，分别占总化合物分类的53.8%和42.9%。此外，KEGG通路富集分析表明脂质代谢是主要的富集通路，包括亚油酸代谢、甘油磷脂代谢和花生四烯酸代谢。ROC图显示了前五种VIP代谢物（3-羟基十六碳二烯酰肉碱、3-羟基辛二酰肉碱、cephagenin、2,4-戊二烯醛和ACar 16:4）在预测哪些奶羊会发生瘫痪方面的性能。该曲线的AUC为0.92或0.88，表明这五种生物标志物具有非常好的预测能力。我们评估了血浆代谢物与生理参数之间的相关性。我们的分析发现，生理参数如GLU、TC、HDL、LDL、TG和ALB与APDS富集的代谢物（如胸腺嘧啶和L-β-高亮氨酸-HCl）呈负相关，或与APDS耗竭的代谢物（如2-乙酰吡啶和L-色氨酸）呈正相关。相反，生理参数如ChE、BUN、CREA和SOD与APDS富集的代谢物呈正相关。

健康和瘫痪奶羊产后微生物特征

Venn图显示HDS和PDS组共享1234个相同的核心ASV。此外，HDS组表现出3619个独特的ASV，而PDS组包含1546个ASV。Alpha多样性计算显示Chao 1、Shannon、Simpson和Ace指数没有显著差异，表明PDS和HDS之间的细菌丰富度和均匀度未改变。我们采用PLS-DA方法区分不同类别，更有效地捕捉微生物群落结构和组成的潜在差异。PLS-DA显示HDS和PDS组在微生物结构和组成上存在差异。在门水平上，两组中前四位的微生物是Proteobacteria、Firmicutes、Actinobacteriota和Bacteroidota，它们合计占所有已识别门的94%以上。在属水平上，两组中前五位的微生物是Escherichia-Shigella、Arthrobacter、Bacteroides、Christensenellaceae_R-7_group和UCG-005。Escherichia-Shigella是最丰富的菌属，在HDS和PDS组中分别占39.59%和22.67%。此外，LEfSe分析显示，在门水平上Fusobacteriota，在属水平上Erysipelatoclostridium、Flavonifractor、Oscillospira、Fusobacterium、Komagataeibacter等菌属在PDS组中富集。相反，在门水平上Patescibacteria，在属水平上Solibacillus、Bacillus、Faecalibacterium、Candidatus_Saccharimonas等菌属在HDS组中富集。我们进一步分析了差异微生物群之间的相关性。鉴定出的微生物形成了两个不同的网络，主要分别在PDS和HDS组中富集。PDS和HDS组的微生物群之间观察到负相关，而每组内部则存在正相关。基于KEGG数据库，使用PICRUSt2预测肠道微生物群的代谢功能。与HDS组相比，PDS组的脂质代谢和异生素生物降解减少，而信号分子和相互作用增加。

健康和瘫痪奶羊产后代谢特征

PLS-DA显示PDS和HDS之间的血浆代谢物存在分离。置换检验的结果表明PLS-DA模型没有过拟合。随后，鉴定出138种差异代谢物，与HDS组相比，PDS组中有79种代谢物上调，59种代谢物下调。在上调或下调的代谢物中，脂质和类脂分子是主要类别，分别占总化合物分类的74.3%和49.1%。此外，KEGG通路富集分析表明脂质代谢是主要的富集通路，例如甘油磷脂代谢、亚油酸代谢、α-亚麻酸代谢和花生四烯酸代谢。有趣的是，肠道菌群代谢功能的PICRUSt2分析显示，与PDS组相比，HDS组中脂质代谢和花生四烯酸代谢的相对丰度更高。在产前和产后鉴定的差异代谢物中，有七种代谢物表现出一致的表达模式，包括两种下调代谢物（L-色氨酸和D-色氨酸）和五种上调代谢物（2,4-戊二烯醛、顺式-4-癸烯酰肉碱、3-羟基辛二酰肉碱、3-羟基异戊酰肉碱和十六烷二酸-单-L-肉碱酯）。这些代谢物与产前和产后期间脂质代谢通路中富集的代谢物密切相关。

差异微生物、功能和代谢物的整合分析

相关性分析显示差异菌属与这些通路密切相关。甘油磷脂代谢与Flavonifractor和Oscillospira呈正相关，但与Candidatus_Saccharimonas呈负相关。苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成与Oscillospira呈正相关。初级胆汁酸生物合成与Flavonifractor、Oscillospira和Komagataeibacter呈负相关，但与Faecalibacterium和Candidatus_Saccharimonas呈正相关。甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢与Flavonifractor和Oscillospira呈正相关。此外，已识别KEGG通路中涉及的代谢物和关键酶在PDS和HDS组之间显示出差异。酶EC 4.1.3.27和EC 4.1.1.19在HDS中的丰度高于PDS组。整合两组之间的变化，包括代谢物丰度和相关的代谢通路，揭示甘油磷脂代谢中的溶血磷脂酰胆碱（LPC）合成、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成中的L-色氨酸合成、以及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢中的2-氧代丁酸合成在PDS组中低于HDS组。然而，初级胆汁酸生物合成中的牛磺酸合成在PDS组中更高。

瘫痪进展阶段血浆代谢物的变化

PLS-DA和OPLS-DA分析揭示了APDS和PDS组之间血浆代谢组的差异。为了表征瘫痪进展阶段改变的血浆代谢物，我们鉴定出282种差异代谢物，与PDS组相比，APDS组中有141种代谢物上调，141种代谢物下调。在前30种差异代谢物中，PDS组相对于APDS组具有较高相对丰度的代谢物包括3-羟基-顺式-5-辛烯酰肉碱、7-羟基辛酰肉碱、10-羟基十七碳酰肉碱、CAR 7:0和N,N,N-三甲基赖氨酸。相反，PDS组中LPC 18:1、LPC 18:2、LysoPC (18:1(11Z)/0:0)、PC (0:0/20:4)等的相对丰度低于APDS组。我们主要关注在细胞过程、代谢和机体系统中富集的差异代谢物的通路。与APDS组相比，PDS组中前三位的差异代谢通路是糖基磷脂酰肌醇锚定生物合成、脂阿拉伯甘露聚糖生物合成和甘油磷脂代谢。此外，差异代谢物在PDS和APDS组之间的花生四烯酸代谢通路中富集。评估了PDS和APDS组改变代谢物和代谢通路的相关性网络。我们的分析表明，血浆中的差异代谢物大多与脂质代谢相关，这些脂质代谢组与其他代谢物和代谢通路形成了一个独立的簇。此外，脂质代谢中的二十二烷二酸（DDA）位于相关性网络的中心，从而表明其在瘫痪进展阶段血浆中的重要性。

讨论

我们的研究观察到瘫痪奶羊在糖脂代谢、蛋白质代谢、肝功能、免疫、氧化应激和血浆元素指标方面的变化。此外，通过比较APDS和AHDS组（均为发病前）的血浆代谢谱，识别出潜在的早期诊断生物标志物，包括酰基肉碱。多组学数据整合揭示脂质和氨基酸代谢变化与瘫痪密切相关。此外，发现DDA在瘫痪进展中起关键作用。最终，本研究为制定预防和管理奶羊围产期代谢紊乱的策略提供了宝贵的见解。

东弗里生-湖羊杂交羊因其产生多胎的遗传潜力而闻名，在妊娠期间经历高能量需求以支持胎儿发育。在妊娠后期，快速的胎儿生长压迫腹部器官，限制母体采食量。这导致能量赤字，支出超过摄入，引起母羊NEB。血浆