综述：解码颅咽管瘤：从机制到治疗

《Best Practice & Research Clinical Endocrinology & Metabolism》：Decoding craniopharyngioma: from mechanisms to therapy

本综述系统梳理了近15年来颅咽管瘤研究的突破性进展，深入阐释了其两种分子亚型（ACP和PCP）的独特发病机制。文章重点揭示了ACP中β-连环蛋白（β-catenin）突变诱导的细胞衰老（Senescence）及其相关分泌表型（SASP）在肿瘤微环境（TME）中的核心驱动作用，并展望了针对BRAF-V600E（PCP）及MAPK通路、SASP（ACP）等靶点的新型疗法从基础向临床的转化前景，标志着颅咽管瘤进入了生物学指导的精准治疗新时代。

　　

摘要

过去15年的研究极大地增进了我们对颅咽管瘤——一种具有挑战性的鞍区肿瘤——的理解。其遗传和组织学上截然不同的亚型——造釉质型（ACP）和乳头型（PCP）——已被解析。ACP主要由CTNNB1突变驱动，导致β-连环蛋白（β-catenin）积聚和WNT通路激活，而PCP则以BRAF-V600E突变为特征。复杂的ACP小鼠模型和人类研究提出了一种衰老驱动的发病机制，即衰老的上皮细胞分泌生长和炎症因子，通过旁分泌信号传导协调形成一个促肿瘤微环境。单细胞RNA测序证实了这一观点，并揭示了复杂的肿瘤生态系统。这些基础性见解正直接指导着新型疗法的开发。包括针对PCP的BRAF/MEK抑制剂和针对ACP中破坏衰老相关分泌表型（SASP）的小分子药物等有前景的靶向方法，正在从实验室向临床转化，为患者 heralding 一个生物学驱动的新时代。

引言

颅咽管瘤（CPs）虽然组织学上为良性，但由于其解剖位置、高复发率和术后长期并发症，构成了巨大的临床挑战。本综述全面综合了关于这些肿瘤的基础和转化研究的最新进展。我们总结了利用批量测序和单细胞测序技术取得的主要发现，这些发现揭示了造釉质型（ACP）和乳头型（PCP）颅咽管瘤在遗传学和生物学上是不同的实体，由不同的遗传学、信号通路和细胞相互作用驱动。在此意义上，我们聚焦于细胞衰老和旁分泌信号在ACP中新兴的作用。我们还讨论了促成这些见解的实验模型，并重点介绍了旨在将分子发现转化为改善患者预后的正在进行中的临床试验，包括MAPK通路抑制、衰老细胞清除剂（senolytics）和抗炎策略。

颅咽管瘤的组织病理学特征

CPs是起源于Rathke囊残余的良性肿瘤（世界卫生组织（WHO）I级）。新诊断颅咽管瘤的年发病率约为每10万人0.13至2例。组织学上，存在两种由不同病理学和遗传学定义的独特实体，即造釉质型和乳头型颅咽管瘤（分别为ACP和PCP）。ACP的诊断具有双峰年龄分布（5-15岁和45-60岁），而PCP仅限于成人，主要发生在50至60岁。两种类型的颅咽管瘤具有不同的组织学外观。

ACP组织学

大体上，ACP表现为鞍上或鞍区的多囊性实体结构，伴有钙化和充满粘稠“机油样”液体的囊肿，该液体富含胆固醇结晶。显微镜下，核心组织学特征是由上皮细胞组成的涡状排列，周围环绕着三层上皮细胞：由栅栏状排列的柱状上皮细胞（具有明显的周边拥挤现象）组成的基底层，形成疏松星形网（具有交替的微囊性和致密上皮区域）的中间层，以及常含有无核嗜酸性湿角蛋白结节（“影子细胞”，一种特异性标记）的内层。肿瘤可能表现出侵袭性生长，指状突起侵入周围脑组织，诱发胶质反应区（GFAP阳性，含有丰富的Rosenthal纤维）。继发性改变包括黄色肉芽肿性反应（继发于囊壁破裂），其特征为胆固醇裂隙、含铁血黄素沉积、泡沫细胞、多核巨细胞和淋巴浆细胞浸润。免疫组织化学显示，肿瘤上皮细胞泛细胞角蛋白（pan-cytokeratin）、CK7、CK8、CK19、CK5/6、EMA、CK14阳性，而涡状结构内呈现核内（易位）和胞浆β-连环蛋白阳性。总体而言，这些肿瘤含有低数量的增殖细胞（Ki67+），这些细胞通常集中在邻近WL形成的周边栅栏状细胞区域。ACP肿瘤上皮BRAF-V600E抗体染色呈阴性。

PCP组织学

大体上，PCPs通常是边界清楚的病变，通常生长为致密的实性肿块或单房囊肿，带有向内侧突出的壁内菜花样结节，邻近漏斗部。值得注意的是，PCPs中宏观钙化几乎完全缺失，而这在ACPs中很常见。显微镜下，核心结构由形成乳头状突起的成熟鳞状上皮组成，中心为纤维血管轴心，表面覆盖着分化良好、形态一致的鳞状上皮。细胞缺乏角化，核分裂象稀少，并且不表现出ACPs的三个定义性组织学特征：基底上皮细胞的栅栏状排列、星形网和“湿角蛋白”结节。肿瘤内常见中性粒细胞浸润，而T细胞和巨噬细胞广泛分布于纤维血管轴心和肿瘤上皮层内，无异物巨细胞反应。肿瘤边界清楚，缺乏侵袭性突起。基底上皮细胞可能显示轻度拥挤，但无显著的栅栏状排列。部分病例可见散在的PAS阳性杯状细胞或局灶纤毛上皮，提示与伴有鳞状上皮化生的Rathke裂囊肿存在组织学重叠。

免疫组织化学显示，PCP的鳞状上皮EMA和CK呈强阳性，包括高分子量细胞角蛋白（CK5/6）和中分子量角蛋白（CK7, CK17, CK19）。与ACPs涡状簇中β-连环蛋白的核浆分布模式不同，PCPs中该蛋白均匀局限于细胞膜。Ki-67免疫组化显示增殖细胞局限于靠近纤维血管轴心的上皮基底层。作为PCP的主要分子标记，鳞状上皮的胞浆BRAF-V600E表达呈阳性。然而，尽管突变存在于整个肿瘤上皮，磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达更局限于纤维血管轴心周围的细胞。

ACP和PCP的不同特征提示了不同的分化途径。ACP的许多特征与发育中的牙齿非常相似，而PCP则显示出分化良好的复层上皮的特征。

颅咽管瘤的遗传学

除了组织学差异，ACP和PCP也显示出相当不同的遗传改变，ACP表现为激活性的CTNNB1（编码β-连环蛋白）突变（频率：68.75% - 100%），而PCP则携带激活性的BRAF-V600E突变（频率：70%–100%）。

ACP遗传学

ACP中唯一反复出现的驱动事件是CTNNB1 exon3的体细胞突变。这些突变破坏了β-连环蛋白的N端降解结构域（热点：S33X 21.6%, S37X 24.3%, T41X 18.9%, 和 D32X 13.5%），阻止了GSK-3β/CK1ɑ的磷酸化，并逃避了APC/Axin/GSK-3β复合物介导的泛素化降解。这导致β-连环蛋白的异常细胞内积聚。积聚的β-连环蛋白易位至细胞核，与TCF/LEF转录因子结合，激活下游靶标（如c-Myc, Cyclin D1, AXIN2），驱动肿瘤增殖、干性维持和侵袭（MMP7/CD44）。核β-连环蛋白积聚是ACP的诊断标志，但显示出异质的空间分布：它主要出现在侵袭性突起基部的“涡状细胞”中，或栅栏状上皮内的孤立细胞中，而大多数突变细胞保留膜表达。值得注意的是，部分ACP样本缺乏可检测的CTNNB1突变，可能是由于检测灵敏度不足或存在替代机制（例如，双等位基因APC截断突变破坏了降解复合物）。

PCP遗传学

PCP中唯一已识别的反复突变是体细胞BRAF-V600E突变。该突变将BRAF激酶第600位的缬氨酸替换为谷氨酸，使得MEK/ERK通路组成性激活，不依赖于RAS。这驱动了ERK核转位，激活转录因子（如c-Myc, CREB）并上调细胞周期蛋白（如Cyclin D1），加速G1/S期转换并促进异常的肿瘤细胞增殖。MAPK通路激活表现出空间异质性，并局限于纤维血管轴心周围的基底细胞，导致干细胞标记SOX2的持续高表达。这使得细胞维持在具有持续增殖能力的未分化状态。

基因组不稳定性

DNA的获得和丢失在癌症中普遍存在，是复制压力、有丝分裂错误、纺锤体多极性和断裂-融合-桥循环等相互关联过程的结果，这些过程可能导致染色体不稳定性和非整倍体。这些拷贝数变异（CNVs）有助于癌症的发生、进展和治疗抵抗。在Apps等人的研究中，14例复发ACP患者中有6例表现出CNVs，包括整条染色体或节段性改变，而匹配的原发肿瘤未显示CNVs。有趣的是，在一个多次复发的肿瘤中，CNVs仅在最近一次复发中被识别，表明复发过程中的克隆进化。外部验证（来自儿科脑肿瘤网络的67例ACPs）证实10%的病例存在臂水平CNVs，可在原发或复发阶段检测到。Zhu等人和Matsuda等人使用单细胞CNV分析探索了CP的基因组特征和瘤内异质性。Zhu等人应用InferCNV发现PCP上皮和成纤维细胞群体中存在显著的染色体缺失/扩增，某些细胞群的高CNV评分提示更高的恶性程度。Matsuda等人揭示了ACP/PCP细胞类型（肿瘤、免疫、成纤维细胞）间的基因组异质性，混合的肿瘤细胞显示出显著的CNV多样性。

颅咽管瘤的转录组景观

最近对人类CPs（特别是ACPs）的单细胞转录组特征分析证实了先前来自批量RNA测序数据和小鼠模型的观察，并为肿瘤微环境（TME）的复杂性提供了重要见解。在接下来的部分，我们将描述ACP中的这些发现，并在适当时具体提及PCP。

ACP中的转录组研究

ACPs的细胞异质性已有充分记录。首次尝试用转录组学表征这种异质性的研究是使用激光捕获显微切割后进行批量RNA测序。这项研究揭示了β-连环蛋白积聚细胞簇、栅栏状上皮和胶质组织的分子特征。该分析证实，正如先前在小鼠ACP模型中所示，细胞簇强烈激活WNT/β-连环蛋白通路并分泌大量生长因子和细胞因子。细胞簇被证明类似于正常牙齿发育过程中的关键信号中心——釉结，并表达分泌因子（例如，FGFs, TGFBs, BMPs, SHH）。事实上，这些分泌因子的下游效应器和靶标在栅栏状上皮和星形网内的周围细胞中表达。在这些研究中，MAPK/ERK通路作为一个潜在的治疗靶点出现，因为其在离体培养中的抑制导致Ki67指数降低和细胞死亡增加。

最近，一些研究在单细胞转录组水平对ACP进行了表征。这些研究证实了广泛的瘤间细胞多样性，并显示在某些样本中，上皮肿瘤细胞可能仅占ACP总细胞数的10-20%。肿瘤细胞的这种低占比解释了在某些样本中未能识别CTNNB1突变的原因。在一项研究中，上皮肿瘤细胞根据其主要的分子特征被分为几组：（i）涡状簇细胞，具有WNT/β-连环蛋白通路（如LEF1, WNT5A）的激活和非增殖表型；（ii）角化上皮（KE），显示角蛋白（KRT6C, KRT7）和粘附分子高表达；（iii）栅栏状上皮，表达应激反应基因（如FOS, JUN）；（iv）增殖细胞，表达细胞周期和DNA复制基因（如UBE2C, TOP2A）。与Ki67染色一致，大多数增殖细胞位于栅栏状上皮内。PCP肿瘤似乎更简单，肿瘤细胞被分为三个簇：（i）发育上皮，表达参与上皮形成（如LCN2, SAT1）和上皮-间质转化（WFDC2）的基因；（ii）细胞周期簇，包含表达TOP2A, CENPF和MKI67的增殖细胞；和（iii）免疫反应簇，表达CXCR4和IGKC等基因。

肿瘤微环境（TME）也通过单细胞分析方法进行了分析。这些研究也证实了先前的观察，表明ACP中存在大量的胶质反应组织，其中富含星形胶质细胞、少突胶质细胞、免疫细胞、内皮细胞和成纤维细胞。似乎很清楚的是，ACP中的TME通常是免疫抑制性的，肿瘤内T细胞浸润很少，而TME中最丰富的免疫细胞类型是巨噬细胞，它们之间存在显著的异质性。事实上，免疫组织化学显示免疫细胞集中在胶质反应组织中，无法穿透肿瘤上皮，仿佛栅栏状上皮形成了一道不可穿透的墙。这与PCP形成对比，在PCP中观察到免疫细胞穿透鳞状上皮。

上述单细胞研究的一个关键发现是识别出涡状簇细胞作为肿瘤内的信号枢纽。这一观察结果证实了先前的功能研究，这些研究揭示这些簇细胞的信号可能影响肿瘤的发生和进展。关于这种旁分泌信号的进一步细节将在下文展开。

颅咽管瘤的研究模型

体外模型

原代细胞培养模型

多项研究报道了建立和使用从颅咽管瘤（CP）组织（主要来自ACP，但也有PCP的例子）分离的细胞建立的原代培养物。CP原代培养最常见的应用是通过RNA或蛋白质表达分析评估信号通路激活。CP原代培养也用于功能测定，其中改变感兴趣基因/蛋白质的表达水平或功能，以探索它们在CP生物学相关特定生物过程中的作用。此类表达和功能研究已针对多种基因和通路进行。这些包括使用分子抑制剂（例如，用于IGF1R的PPP，用于EGFR的Gefinitib，用于BMP2的Noggin，抗IL6抗体，用于BRAF的Dabrafenib，用于HDAC3的RGFP966和用于整合素受体结合的Cilengitide）、受体激动剂（例如，用于P2X7R的BzATP，用于RAR的全反式维甲酸）、小干扰RNA（siRNAs）（例如，Survivin, P2X7R, HDAC3, CTNBB1, Fascin, CLDN1, CALB2）以及通过脂质或慢病毒载体传递质粒进行瞬时基因表达（例如，POSTN, IL1R1和突变β-连环蛋白）。

在CP原代培养中，测试上述分子干预时最常研究的变量包括：细胞活力（主要基于MTT的方法）；细胞增殖（使用细胞计数、流式细胞术、胸苷类似物摄取和集落形成测定）；细胞迁移和侵袭能力（使用Boyden小室和划痕愈合测定）；钙化以及成骨或成脂分化能力。除了探索基因表达和功能，原代培养还用于测量培养基中的分泌蛋白水平，然后这些蛋白可用于在体内模型中测量这些蛋白质在下丘脑或其他相关结构中的作用。

建立和维持CP原代细胞培养最广泛使用的方法是基于为分离和培养上皮细胞（特别是角质形成细胞）设计的方案。然而，在文献中，培养基成分、细胞选择方法和培养物表征标准的进一步调整非常普遍。在培养物表征方面，大多数研究集中于两个标准：1）形态学描述和2）分析上皮细胞分子标记的表达。关于第一个标准，大多数研究报道获得了显示辅路石状、鹅卵石状或多边形形态的细胞，而一些研究报道了培养物中存在纺锤形细胞，甚至一些研究观察到这两种形态之间的转变。对于第二个标准，大多数研究分析了单个或多个细胞角蛋白的表达（使用抗CK7或泛细胞角蛋白抗体），而波形蛋白（在间充质细胞中高表达的中间丝蛋白）表达的缺乏也偶尔被用作阴性对照。值得注意的是，只有少数研究在原代培养中表征了β-连环蛋白的表达和细胞内定位，而其核浆（相对于膜）定位是区分ACP和PCP的诊断标志。

在原代CP细胞培养期间报道了表型变化，包括形态转变（从上皮样到纺锤形）以及广泛的基因表达变化。这些变化可能是由于最终的细胞分化，但也可能与特定细胞类型的过度生长有关。在这方面，一个主要担忧是建立的原代培养物主要由非肿瘤细胞组成，并且来源于手术切除过程中无意取样的邻近脑组织或膜性组织。只有极少数研究分析了原始CP组织和培养细胞的突变状态，甚至有一项研究报道在其中一个建立的培养物中缺乏已识别的CTNNB1突变。考虑到免疫染色实验显示β-连环蛋白的突变形式（通过测序在ACPs中识别）仅在肿瘤内表达，而不在浸润细胞或周围胶质组织中表达，这一点很重要。因此，证明原代培养物含有与原始肿瘤相同的突变对于验证原代培养物作为CP生物学的适当模型至关重要。

尽管自20世纪70年代末以来就有报道从CP组织建立原代细胞培养，并且许多研究声称建立原代培养的效率很高（有时达到100%），但跨实验室的方法可重复性仍然是该领域的一个主要问题。原代细胞培养物固有的表型变异性的生物学因素肯定会导致这个问题，例如瘤内细胞多样性。然而，不同研究之间关于培养方法和条件的异质性报告，加上松散的表型表征标准，给该领域的进步带来了重大挑战。虽然已有关于两种CP亚型的永生化细胞系和类器官的报道，但这些模型及其方法尚未被更广泛的团体采纳。尽管如此，将严格的验证策略与此类系统相结合，必将提高CP生物学体外实验的可重复性和通用性。

离体模型

患者来源的异种移植（PDX）模型

CP原代细胞培养具有多种局限性，包括有限的存活时间、缺乏生物学相关的微环境以及简化的药物动力学和药效学。一些团体试图通过将培养的人类CP原代细胞或肿瘤组织片段移植到小鼠宿主体内来规避这些问题。

这些模型的目的是允许使用磁共振成像（MRI）离体监测移植肿瘤的发展、生长和侵袭性，或对移植组织切片进行分子分析。另一个优点是，与体外培养相比，它们可以允许更长的实验周期（数月对比几天）。除了原理验证研究，这些模型已被用于显示原代CP细胞或新型CP细胞系的致瘤潜力。然而，PDX模型也被用于评估药物如Vismodegib、Arlotinib、Vemurafenib和S-amlodipine的体内抗肿瘤活性。

大多数报道的患者来源异种移植（PDX）模型涉及将细胞或CP组织片段移植到小鼠或大鼠体内。虽然一些研究进行了皮下移植，但大多数模型涉及移植到大脑中（前额叶皮层或脑室区域），以更接近地模拟CPs的解剖位置。

尽管具有潜在优势，但CP PDX模型的建立和表征面临着多重挑战。与CP原代细胞培养类似，关于PDX模型验证方法的信息迄今为止有限，并且在不同研究组之间各不相同。移植组织的组织学描述往往非常笼统，分子表征通常仅限于少数标记物，如β-连环蛋白和泛细胞角蛋白。对于ACP组织片段，几个团体报道了存在这种CP亚型的一些定义性标志，如上皮涡、星形网、栅栏状上皮、湿角蛋白和钙化。这表明原则上，CP肿瘤组织可以在小鼠宿主体内存活一段时间。

建立稳健的CP PDX模型意味着多重挑战。对于ACP，细胞活力、移植和生长似乎与供体样本中囊性或钙化组织的数量成反比，而这些组织在这种CP亚型中含量丰富。当前PDX模型的另一个缺陷是需要免疫缺陷小鼠，这排除了研究免疫系统和炎症在CP生物学中影响的可能性。

然而，CP PDX模型验证的最大挑战在于证明移植组织来源的分析。大多数已发表的PDX研究没有报道证实移植组织含有与原始CP活检或原代培养细胞相同的突变，这增加了部分（或全部）推定移植组织来源于宿主的可能性。在我们的文献综述中，我们只发现一项研究报道其所有ACP异种移植组织含有与注射的原代细胞系和原始肿瘤相同的CTNNB1 exon3突变，但没有显示测序数据作为证据。类似地，只有一项研究报道了用永生化PCP细胞诱导的异种移植中存在BRAF-V600E突变。CP的PDX模型验证将受益于证明移植细胞的命运，这可以通过在原始肿瘤活检、原代细胞培养和移植组织中进行靶向测序（例如，ACP中的CTNNB1 exon3突变和PCP中的BRAF-V600E）来实现。额外的策略可包括表达报告基因的移植细胞的谱系追踪，或使用物种特异性抗体结合免疫组织化学和流式细胞术。

离体肿瘤外植体培养

鉴于原代细胞培养和PDX模型带来的技术挑战，我们小组建立了一种替代方法，将肿瘤片段在体外培养长达2周。这种简单而有效的模型已与人类和小鼠ACP样本（小鼠ACP模型将在后面描述）一起实施。这种方法允许进行短期药物测定，同时保持这些肿瘤特征的结构复杂性和细胞类型多样性。例如，离体外植体培养已被用于显示Vismodegib治疗导致人ACP外植体培养物中SHH通路下调，从而导致肿瘤细胞增殖增加。

值得注意的是，离体培养也可以促进在小鼠CP模型中进行的分子研究。来自这些模型的外植体培养物已被用于显示MAPK抑制剂Trametinib在消除p-ERK1/2激活、诱导细胞死亡和减少细胞增殖方面的功效。类似地，该模型在证明乌本苷和一种duocarmycin前药通过允许分析它们对衰老β-连环蛋白积聚细胞数量的衰老细胞清除作用实验中发挥了重要作用。

囊肿液体损伤模型

ACPs的定义性特征之一是出现含有脂质和胆固醇丰富物质的囊肿，该物质通常被描述为“机油”，因其粘稠外观而得名。囊肿腔的位置和大小在确定最合适的手术方法时具有重要的临床意义。因此，囊肿液体（CF）引流通常事先进行或与手术同时进行，既便于切除，又可防止囊肿液体溢出导致术后并发症。

CF溢出到邻近脑结构的确切性质和影响尚不完全清楚。然而，有报道称CF含有多种促炎因子，被认为有助于ACP患者观察到的一些神经生理学改变，如下丘脑性肥胖。一些实验模型被设计来检验这些假设，基于两种不同的方法：1）将人CF体内应用于小鼠或大鼠的大脑；和2）将细胞培养物暴露于人CF。

第一种方法涉及在宿主动物中进行立体定向手术，将人CF直接递送到皮层、下丘脑或侧脑室。皮层注射表明CF导致神经胶质增生和炎症标记物过度表达、活性氧积累和脂质过氧化。对腹内侧下丘脑核注射的报道也观察到类似现象，导致促炎症和神经元分化标记物的表达改变。有趣的是，在皮层和下丘脑CF注射模型中均观察到体重增加减少和肥胖减轻，尽管一项研究观察到将CF直接注射到外侧下丘脑的小鼠摄食行为快速增加，随后长期体重减轻。或者，使用微型泵向第三脑室给药被认为允许更可控地施用CF和其他化合物，如小分子抑制剂。结合下丘脑原代细胞培养的体外实验，这些模型的发现支持CF部分通过诱导神经胶质细胞的促炎反应引起下丘脑神经元损伤的观点。

当前囊肿液体模型的一些注意事项与分离和操作CF的技术难度有关，这是由于CF的物理性质和囊肿大小的可变性。这意味着几乎所有使用上述模型的研究都需要汇集来自多个不同患者的CF以获得足够的样本量，从而减少了实际测试的生物学重复数量。

体内模型

ACP的小鼠模型

如前所述，大多数ACP病例以β-连环蛋白基因（CTNNB1）第三外显子的功能获得性突变为特征。这一事实被用来开发两种发生肿瘤的小鼠模型，这些肿瘤与人类ACP共享多种组织学、影像学和分子特征。

在一个胚胎ACP小鼠模型中，致癌β-连环蛋白的表达受Hesx1基因座控制（Hesx1^Cre/+; Ctnnb1^lox(ex3)/+模型），该基因座在垂体胚胎前体——Rathke囊的祖细胞中活跃。该模型中的谱系追踪实验显示，Hesx1+细胞产生大部分垂体实质，包括SOX2+和SOX9+干细胞，以及所有垂体激素分化谱系。在垂体腺发育早期，Hesx1^Cre/+; Ctnnb1^lox(ex3)/+胚胎中的一些靶向细胞过度表达核浆积聚的β-连环蛋白，形成紧密的细胞簇，类似于人类ACP中发现的上皮涡。这些簇在整个发育过程和成年早期保留在垂体腺中。大约在2-4个月大时，取决于遗传背景，大多数突变小鼠发生从鞍区爆炸性生长的颅内肿瘤。尽管完全发育的肿瘤缺乏几个经典的ACP区室，如栅栏状上皮、β-连环蛋白积聚涡（取而代之的是大片的均质β-连环蛋白核浆积聚区域）、湿角蛋白、钙化或星形网；但它们确实显示出与人类ACP在MRI成像上具有惊人相似性的囊肿。

第二个小鼠ACP模型基于仅在成年SOX2+干细胞中他莫昔芬诱导表达致癌β-连环蛋白（Sox2^CreERT2/+; Ctnnb1^lox(ex3)/+模型）。与胚胎模型类似，这些小鼠在诱导后几周内形成核浆β-连环蛋白细胞簇，随后发生肿瘤，与胚胎模型中发现的肿瘤相似。该模型的一个优点是诱导的时间和水平可以控制，允许探索年龄对肿瘤发生的影响、单个β-连环蛋白簇的贡献和相互作用，以及进行更复杂的谱系追踪实验。

尽管与人类ACP存在差异，这两种模型在通过WNT信号通路过度激活定义β