C14orf119多克隆抗体的开发与验证：缺血性卒中新型线粒体靶点研究的关键工具

本研究针对缺血性卒中（IS）相关线粒体蛋白C14orf119，通过原核表达系统成功制备并验证了高特异性多克隆抗体。该研究采用His/GST双标签纯化策略，证实抗体可特异性识别内外源性C14orf119，且通过GST亲和纯化有效去除非特异性抗His抗体，为后续功能研究提供了关键分子工具。

　　

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C14orf119多克隆抗体的开发与验证：缺血性卒中新型线粒体靶点研究的关键工具

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细胞、试剂和质粒

HEK-293T、HeLa、NCI-H1299、HGC-27、SW-1990和HCT-116细胞购自国家细胞系资源库。HEK-293T、HeLa和HCT-116细胞使用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养；NCI-H1299、HGC-27和SW-1990细胞使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养。Rosetta（DE3）和BL21（DE3）感受态大肠杆菌细胞购自天根生化科技（北京）。Flag抗体（F1804）用于检测标签蛋白表达。

重组C14orf119的表达与纯化

为表达人C14orf119蛋白，我们通过PCR扩增其编码序列，并分别克隆至带有His标签和GST标签的pQE-30和pGEX-6P-1载体中（图1A）。质粒构建成功通过限制性内切酶消化分析（图S1）和测序验证。转化菌经IPTG诱导后，通过超声破碎细胞，分别使用His-Tag亲和层析和GST亲和层析纯化获得His-C14orf119和GST-C14orf119重组蛋白。

讨论

作为与IS易感性相关的新型未表征蛋白，C14orf119的功能研究亟需特异性抗体支持。本研究通过原核表达和层析纯化技术，成功制备了高特异性的抗C14orf119多克隆抗体，并利用该抗体在多种常用肿瘤细胞系中完成了C14orf119表达谱的特征分析。

本研究达到的1:512,000抗血清效价，在同类抗体开发中表现出显著优势，为后续机制研究奠定了坚实基础。通过双标签纯化策略，有效消除了抗His标签抗体的交叉反应，证明该抗体具备卓越的特异性。值得注意的是，该抗体在线粒体定位检测中的优异表现，为揭示C14orf119在线粒体功能障碍中的具体作用提供了关键技术支撑。

结论

我们成功开发了针对人C14orf119蛋白的高特异性多克隆抗体，经验证该抗体能够有效识别内外源性C14orf119，且在线粒体定位检测中表现出色。该分子工具的建立为深入解析C14orf119在缺血性卒中病理过程中的功能机制提供了重要技术保障。