通过组合调节剂优化双特异性抗体生物类似物的N-糖基化谱以匹配参照药

本文系统研究了半乳糖、MnCl2和Tris等调节剂对双特异性抗体（BsAb）生物类似物N-糖基化谱（包括半乳糖基化、甘露糖和岩藻糖水平）的协同调控作用。研究发现0.75 mM Tris与8 mM半乳糖联用可使Bs-mAb1的糖基化谱与参照药高度一致，且不影响细胞生长、代谢、电荷异质性或纯度，为生物类似物糖基化精准调控提供了创新策略。

　　

Highlight

Cell line and reagents

CHO-K1细胞（购自Merck）被用于稳定表达一种双特异性抗体的所有实验。扩增培养基（M1）、流加培养基础培养基（M2）以及补料培养基（FM1/FM2，按10:1比例混合）均购自Cytiva。氯化锰（MnCl₂）、半乳糖和三羟甲基氨基甲烷（Tris）购自Sigma-Aldrich。葡萄糖购自上海生工。

Seed expansion

将细胞解冻至125 mL摇瓶，初始工作体积为25 mL。培养物维持在...

Results

生物类似物Bs-mAb1的糖基化谱与参照药相比存在显著差异——尤其是在甘露糖、半乳糖和岩藻糖方面。具体而言，甘露糖和半乳糖的糖基化水平分别降低了113.7%和90.0%，而岩藻糖糖基化水平则高出5.0%（图1a）。为了使生物类似物的糖基化谱更接近参照药，本研究评估了半乳糖和MnCl₂在提升...方面的效果。

Discussion

糖基化是单克隆抗体（mAb）的关键质量属性（CQA），影响其疗效、稳定性和免疫原性。在本研究中，我们系统评估了半乳糖、MnCl₂和Tris对一种双特异性抗体生物类似物的N-糖谱、细胞生长、代谢和产品质量的影响。选择这些添加剂是基于它们在调节特定糖基化通路中已确立或潜在的作用，目标是提高与参照药的相似性。

Conclusion

单克隆抗体和重组蛋白的糖基化修饰是关键质量属性，对药物的疗效、安全性和半衰期具有显著影响。糖基化位点、聚糖类型和聚糖丰度等关键因素会影响产品的生物活性、稳定性和整体性能。在上游工艺开发过程中，可以通过仔细的细胞系选择、基因工程、工艺参数优化以及培养基添加剂（如糖和金属离子）来调节糖基化。