RAB27A基因疗法在干细胞中的潜在副作用评估：对Griscelli综合征2型治疗安全性的启示

本研究针对Griscelli综合征2型（GS-2）基因治疗开发需求，评估了RAB27A过表达在健康干细胞中的潜在副作用。研究人员通过慢病毒载体在造血干细胞/祖细胞（HSPCs）和骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）中过表达RAB27A，发现其虽引起表型变化和集落形成能力下降，但未诱发肿瘤生成。该研究为GS-2基因疗法的安全性优化提供了关键依据。

　　

RAB27A基因在细胞外吐（exocytosis）和细胞内囊泡运输（intracellular vesicle trafficking）调控中扮演关键角色。当RAB27A基因发生功能缺失突变（loss-of-function mutations）时，会导致免疫细胞功能障碍并引发Griscelli综合征2型（GS-2）；相反，在癌细胞中RAB27A的上调（upregulation）则与预后不良和转移增强相关。为开发GS-2的基因治疗策略，研究人员系统评估了RAB27A过表达（overexpression）在不同类型健康干细胞中的潜在副作用。

实验采用来自GS-2患者和健康捐赠者的骨髓间充质干细胞（BM-MSCs），以及健康小鼠骨髓来源和人脐带血来源的造血干细胞/祖细胞（HSPCs）。通过携带密码子优化RAB27A（RAB27Aco）转基因的慢病毒载体（lentiviral vectors）进行细胞转导（transduction），并利用流式细胞术（flow cytometry）、蛋白质印迹（Western Blot）和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）进行功能评估。体内实验通过小鼠移植模型（transplantation assays）分析RAB27A对干细胞功能的影响，其中移植存活率（engraftment）通过流式细胞术检测，而BM-MSCs注射部位的组织切片则采用组织染色（histological staining）进行分析。

研究结果显示，RAB27A的过表达引起了BM-MSCs的表型变化，并降低了HSPCs的集落形成能力（colony-forming capacity）。值得注意的是，移植RAB27A阳性干细胞并未引发任何肿瘤生成（tumorigenesis）。尽管移植前HSPCs中RAB27A表达水平较高，但外周血、骨髓和脾脏细胞中的RAB27A水平持续偏低，暗示其过表达可能影响了干细胞的长期重建潜力（long-term reconstitution potential）。该研究表明，针对GS-2的基因治疗开发需对RAB27A表达进行精细调控（fine-tuning），但由RAB27A诱导的肿瘤发生风险较低。