血清ApoC1作为乳腺癌无创诊断与预后生物标志物的潜力：一项前瞻性病例对照研究

本刊推荐：本研究前瞻性探讨血清载脂蛋白C1（ApoC1）在乳腺癌（BC）诊断与预后中的价值。结果显示ApoC1在BC患者中显著下调（p<0.001），ROC曲线下面积（AUC）达1.00，最佳截断值15.4 mg/dL时灵敏度、特异度及准确率均为100%。特别在HER2过表达亚型中，ApoC1呈现显著低表达（3.87±0.63 vs 11.66±1.79 mg/dL，p<0.0001），cutoff值5.6 mg/dL可精准区分HER2+患者（PPV/NPV=100%）。研究表明血清ApoC1是极具潜力的无创生物标志物。

　　

ABSTRACT

背景与目的（Background and Aims）

乳腺癌（BC）作为最常见恶性肿瘤之一，其早期诊断面临重大挑战。载脂蛋白C1（ApoC1）在多种癌症中被证实具有诊断与预后价值，但其在乳腺癌中的作用尚未明确。本研究旨在探讨血清ApoC1浓度在新发乳腺癌病例中的诊断意义。

方法（Methods）

这项前瞻性病例对照研究纳入76例新发乳腺癌患者及15例健康对照。通过ELISA法检测血清ApoC1浓度，采用Student's t检验、单因素方差分析（ANOVA）及Dunnett事后检验进行数据分析。

结果（Results）

乳腺癌患者平均年龄49.21±10.42岁。诊断性能方面，ApoC1在乳腺癌患者中呈现显著下调（p<0.001）。ROC曲线分析显示曲线下面积（AUC）为1.00（95%CI:0.96-1.00），表明ApoC1在区分乳腺癌患者与健康个体方面具有卓越诊断价值。最佳截断值为15.4 mg/dL，此时灵敏度、特异度及准确率均达100%。预后分析显示HER2过表达患者ApoC1浓度（3.87±0.63 mg/dL）显著低于其他亚型（11.66±1.79 mg/dL，p<0.0001），ROC分析确定其预后截断值为5.6 mg/dL，阳性预测值（PPV）与阴性预测值（NPV）均为100%。

结论（Conclusion）

血清ApoC1可作为乳腺癌诊断的潜在生物标志物，并具有高度准确的预后预测价值，特别是在HER2阳性亚型中表现突出。

1 引言（Introduction）

乳腺癌是美国及伊朗女性中最常诊断的恶性肿瘤之一，伊朗女性发病率约为22/10万。早期诊断与适当治疗可显著降低长期死亡率。目前 mammography 是标准筛查方法，但对40岁以下女性、致密乳腺组织及小肿瘤检测敏感性有限，且不能提供预后信息。MRI虽可检测 mammography 遗漏的小病灶，但特异性低且假阳性率高。其他方法如超声、CT、PET扫描及现有血清标志物均非可靠筛查手段。

新型生物标志物的发现成为癌症研究焦点，尤其青睐血液、唾液或尿液等易获取体液中的标志物。载脂蛋白（Apos）作为脂蛋白组分参与脂质运输，人类共有22种Apo成员。研究表明Apos在肺癌、胃癌、结直肠癌等多种癌症中具有诊断与预后价值，并通过调控PI3K/Akt、MAPK、Wnt等信号通路参与癌症进展，影响凋亡抵抗、炎症、氧化应激、耐药、血管生成、转移及持续增殖等机制。

ApoC家族（主要为ApoCI、ApoCII、ApoCIII）在癌症生物学中作用复杂。近期研究发现ApoC不仅是治疗靶点，更是多种恶性肿瘤中有价值的预后与诊断标志物。例如在胰腺癌中，组织与血清ApoC1水平升高与不良预后相关；而在乳腺癌模型中，纯化ApoC1肽段可抑制细胞增殖并抑制裸鼠移植瘤生长；ApoC1过表达可区分三阴性乳腺癌（TNBC）与非TNBC，成为TNBC潜在预后标志物；在前列腺癌中，ApoC1 mRNA与蛋白表达上调抑制凋亡促进细胞存活，血清高水平与不良预后相关。

相反，在非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清中观察到ApoC1水平降低，提示其可能发挥抑癌作用；在甲状腺乳头状癌（PTC）中，ApoC1下调与更高临床分期相关。基于乳腺癌高发病率及ApoC1在癌症中作用的矛盾数据，本研究旨在评估血清ApoC1在新发乳腺癌中的诊断价值。

2 方法（Methods）

2.1 伦理考量（Ethical Consideration）

本研究经设拉子医科大学伦理委员会批准（IR.SUMS.MED.REC.1400.617），所有参与者签署知情同意书，研究遵循1964年《赫尔辛基宣言》及其后续修正案伦理标准。

2.2 样本选择（Sample Selection）

这项前瞻性病例对照研究纳入2022年4月至12月就诊于Amir-al-Momenin Gerash医院的76例伊朗乳腺癌患者。对照组为15例健康个体，严格匹配年龄、月经状态、婚姻状况、体重指数（BMI），且无癌症、慢性疾病或活动性炎症病史。

2.3 样本量计算（Sample Size Calculation）

根据公式计算样本量，检验效能设为80%，α=0.05，最终纳入76例患者与15例健康对照。

2.4 流程（Procedure）

从病历中提取患者临床数据，包括年龄、肿瘤大小、核分级、静脉与淋巴浸润、淋巴结转移、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）及人表皮生长因子受体2（HER2）状态。肿瘤分类基于AJCC最新版TNM分期系统。

2.5 纳入与排除标准（Inclusion and Exclusion Criteria）

纳入明确诊断乳腺癌患者，排除曾接受化疗或放疗、伴有急性或慢性基础疾病（如糖尿病、高脂血症、感染、肾脏疾病、风湿性疾病、其他恶性肿瘤）者。

2.6 ApoC1检测（ApoC1 Assay）

采集所有参与者血样，分离血清并于-80°C保存。使用ELISA试剂盒（Elabscience Biotechnology Co. Ltd）检测血清ApoC1浓度，所有检测重复进行以增强可靠性。

2.7 统计分析（Statistical Analysis）

数据以均值±标准差（SD）或频数（百分比）表示。使用Shapiro-Wilk检验正态性（p>0.05提示正态分布），Levene检验方差齐性（p>0.05提示方差齐）。两组比较采用Student's t检验，多组比较采用单因素ANOVA与Dunnett事后检验。采用逻辑回归分析ApoC1浓度与临床变量（如年龄、疾病分期、淋巴结受累）的关联，ROC曲线分析评估ApoC1诊断能力。使用SPSS 16.0与MedCalc 20.1.4软件，p<0.05视为有统计学意义。

3 结果（Results）

3.1 女性乳腺癌患者基线特征（Baseline Characteristics of Female Breast Cancer Patients）

研究纳入76例女性乳腺癌患者与15例健康对照。乳腺癌组平均年龄49.21±10.42岁（范围26-75岁），BMI 25.84±4.75 kg/m²（范围13.6-34.6 kg/m²）；对照组平均年龄45.13±12.1岁（范围25-65岁），BMI 23.46±4.76 kg/m²（范围15.2-32.4 kg/m²）。大多数乳腺癌患者无癌症家族史（86.8%），超重（35.5%）或肥胖（17.1%），90.8%已婚，94.3%至少有1个孩子（中位数3个）。患者分子分型包括Luminal A（51.3%）、Luminal B（17.1%）、基底样（13.2%）及HER2过表达（18.4%）。疾病分期：I期23.7%、II期46%、III期25%、IV期5.3%。详细基线与临床病理特征见表1。

3.2 ApoC1与基线变量的关联（Association Between ApoC1 and Baseline Variables）

采用t检验与ANOVA分析血清ApoC1浓度与人口学/临床数据的关联，结果总结于表1。值得注意的是，ApoC1水平在HER2阳性患者中显著降低（3.87±0.63 mg/dL），而Luminal A（11.64±1.97 mg/dL）、Luminal B（11.63±0.99 mg/dL）与基底样（11.79±1.99 mg/dL）间无显著差异（p<0.001）。ER阳性（11.76±1.51 mg/dL）与PR阳性（11.96±1.53 mg/dL）患者ApoC1水平显著高于阴性组（分别为7.28±4.19 mg/dL与8.29±3.95 mg/dL，p<0.001）。

3.3 ApoC1的诊断性能（Diagnostic Performance of ApoC1）

比较76例乳腺癌患者与15例健康对照的ApoC1水平，两组间存在显著差异（表2，图1）。效应量（ES=3.05）表明强临床效应。ApoC1在乳腺癌患者中显著下调（p<0.001）。ROC分析显示AUC为1.00（95%CI:0.96-1.00；p<0.001），表明卓越诊断性能（图2，表3）。采用k折交叉验证（k=10）确保模型稳健性并减少过拟合。在最佳截断值15.4 mg/dL时，ApoC1实现100%灵敏度、特异度、PPV、NPV及总准确率。

3.4 ApoC1的预后性能（Prognostic Performance of ApoC1）

根据HER2表达分层评估预后价值。ANOVA显示HER2+组与各其他亚型间ApoC1水平存在显著差异（所有比较p<0.0001）（图3）。t检验证实HER2+患者ApoC1水平显著低于非HER2患者（p<0.0001）（表2，图3）。ROC分析（图4，表3）显示ApoC1截断值5.6 mg/dL可区分HER2+患者，PPV与NPV均为100%。除1例57岁Luminal A患者ApoC1水平为4.76 mg/dL外，所有HER2+患者均低于此阈值。

4 讨论（Discussion）

本研究探讨血清ApoC1在新发乳腺癌中的诊断潜力。结果表明血清ApoC1水平能以100%灵敏度、特异度及预测值区分乳腺癌患者与健康对照，并在区分HER2阳性亚型中表现强劲，提示其兼具诊断与亚型预测能力。

乳腺癌早期诊断仍是改善生存结局的基石。尽管 mammography 与MRI等常规影像学方法有助于早期检测，但因成本、可及性、辐射暴露及对年轻女性敏感性降低而存在局限，凸显了对准确、微创、经济有效且能补充或替代现有策略的生物标志物的需求。

血清作为非侵入性且广泛可及的生物样本，为标志物发现提供希望。蛋白质组学研究已探索众多乳腺癌诊断候选物，但再现性与标准化问题阻碍临床转化。在此背景下，载脂蛋白（Apos）因生物学相关性及血清中稳定可检测性而受到关注。

ApoC1是主要于肝脏表达的6.6 kDa小蛋白，参与脂质代谢、免疫调控与细胞信号传导。其在神经退行性疾病及胰腺癌、肺癌、结直肠癌等恶性肿瘤中作用显著。在乳腺癌中，其作用仍在演变。早期使用SELDI-TOF与MALDI-TOF-MS技术的研究显示乳腺癌患者血清ApoC1降低，并通过肽段表征（尤其在TNBC模型中）发现抗肿瘤活性。本研究证实这些发现，报告乳腺癌队列ApoC1水平较健康个体显著降低，且较低水平与HER2过表达相关，这与先前将HER2阳性与不良预后关联的研究一致。由于HER2信号与脂质代谢及载脂蛋白调控改变相关，这些代谢转变可能解释观察到的负相关关系。因此，ApoC1可能代表HER2驱动乳腺癌中脂质调控与致癌信号间的代谢链接。

除乳腺癌外，ApoC1在结直肠癌、胰腺癌、肾癌等多种癌症中显示诊断与预后效用。在急性髓系白血病中，ApoC1影响组蛋白修饰支持白血病增殖，进一步强调其多效致癌潜力。这些发现提示ApoC1不仅作为疾病标志物，更是跨肿瘤类型的潜在治疗靶点。

本研究确定ApoC1诊断截断值为15.4 mg/dL，在区分乳腺癌与对照中产生完美预测指标。此优异性能凸显ApoC1作为可靠标志物的前景。但不同研究中ApoC1水平差异可能源于样本制备、人群异质性或分析平台不同，强调临床实施前需标准化方案与外部验证。

本研究优势包括严谨统计方法、标准化ELISA检测及独立外部验证队列，共同增强结果再现性与可靠性。研究设计允许探索ApoC1水平的亚型特异性差异，强化其临床相关性。但需承认若干局限：相对小样本量及有限对照组制约统计效能与结果普适性；未将肿瘤分期、淋巴结状态、激素受体表达等临床参数与ApoC1水平关联；年龄分布狭窄可能限制向更广年龄组外推。需更大规模、更多样人群的研究证实这些发现并探索治疗与随访期间ApoC1的纵向变化。

尽管ELISA是实用且可扩展平台，但常规筛查实施需考虑成本、检测标准化及临床工作流程整合。重要的是，需生存分析与预后模型确定ApoC1水平是否与复发、死亡等结局相关。

5 结论（Conclusion）

总之，本研究强调血清ApoC1在乳腺癌中的诊断与亚型区分潜力。其高准确性结合非侵入性检测，表明ApoC1在早期检测策略与个性化护理（尤其HER2阳性亚型）中作为标志物的前景广阔。持续研究以验证并阐明ApoC1在乳腺癌中的生物学基础对将这些发现转化为临床实践至关重要。