ACTN4基因扩增与Actinin-4蛋白表达对奥希替尼在EGFR突变非小细胞肺癌疗效影响的研究

本研究深入探讨了ACTN4基因扩增及其编码的Actinin-4蛋白表达与第三代EGFR-TKI奥希替尼在EGFR突变非小细胞肺癌（NSCLC）患者中疗效的关联。结果表明，Actinin-4免疫组化（IHC）阳性及ACTN4荧光原位杂交（FISH）阳性是奥希替尼治疗预后不良的潜在生物标志物，为临床精准筛选优势人群、优化治疗策略提供了重要依据。

　　

引言

表皮生长因子受体（EGFR）突变是非小细胞肺癌（NSCLC）的重要驱动基因，尤其在亚洲人群中发生率较高。奥希替尼作为第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI），已成为EGFR突变晚期NSCLC的一线标准治疗，其疗效在FLAURA等临床试验中得到证实。然而，奥希替尼的获得性耐药仍是临床面临的主要挑战，其机制复杂多样，包括EGFR C797S突变、MET扩增等遗传学改变，以及非遗传学机制。为了克服耐药并提升疗效，联合治疗策略（如奥希替尼联合化疗）被探索并显示出优势，但同时也增加了不良反应的风险。因此，寻找能够预测奥希替尼疗效和预后的可靠生物标志物至关重要。Actinin-4（基因名：ACTN4）是一种肌动蛋白结合蛋白，在肿瘤的侵袭和转移过程中发挥作用。既往研究提示，Actinin-4蛋白高表达和ACTN4基因扩增可能与肺癌的恶性程度及对某些化疗药物的敏感性相关，但其在晚期EGFR突变NSCLC接受奥希替尼治疗中的意义尚不明确。本研究旨在评估ACTN4扩增和Actinin-4蛋白表达是否与奥希替尼在EGFR突变NSCLC中的疗效相关。

材料与方法

本研究回顾性分析了2018年8月至2021年10月期间在日本医科大学医院接受奥希替尼作为一线治疗的63例晚期EGFR突变NSCLC患者，所有患者均有可用的治疗前肿瘤组织标本。收集的临床数据包括年龄、性别、美国东部肿瘤协作组体能状态（ECOG PS）、吸烟史、组织学类型、临床分期、转移部位、EGFR突变类型（19号外显子缺失[Ex19del]、21号外显子L858R点突变[L858R]或其他罕见突变）以及程序性死亡配体1（PD-L1）肿瘤比例评分（TPS）。疗效评估依据实体瘤疗效评价标准（RECIST）1.1版，主要研究终点为无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）。

采用免疫组织化学（IHC）法检测福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肿瘤组织标本中的Actinin-4蛋白表达。使用抗人Actinin-4单克隆抗体进行染色，由三位独立研究者评估结果。将≥30%的肿瘤细胞呈现阳性染色的病例定义为Actinin-4 IHC阳性，其余为阴性。对于IHC阳性的病例，进一步使用荧光原位杂交（FISH）技术检测ACTN4基因扩增情况。FISH探针靶向19号染色体长臂13.2区（19q13.2）的ACTN4基因区域，并以19号染色体着丝粒探针作为对照。通过计数20个非重叠细胞核中的荧光信号，计算ACTN4基因信号与着丝粒信号的平均比值（ACTN4/CEP19），比值≥2.0定义为ACTN4 FISH阳性。

统计分析采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，并用log-rank检验进行比较。使用Cox比例风险模型计算风险比（HR）。为平衡组间基线特征差异，采用了倾向评分加权分析。多变量分析纳入了单变量分析中显著的因素。所有分析使用EZR软件完成，p值<0.05认为有统计学意义。

结果

患者特征

在纳入的63例患者中（中位年龄73岁），所有肿瘤均为腺癌。根据IHC结果，33例（52.4%）为Actinin-4 IHC阳性，30例（47.6%）为阴性。与IHC阴性组相比，IHC阳性组包含了更多PS评分2-4分、有吸烟史、临床分期为IVB期以及PD-L1表达≥1%的患者。在EGFR突变类型分布上，IHC阳性组中Ex19del突变比例较低（42% vs 60%），而罕见突变比例较高（9% vs 3%）。

在33例Actinin-4 IHC阳性病例中，对32例有剩余组织样本的病例进行了FISH检测。其中4例（12.5%）为ACTN4 FISH阳性，25例为阴性，3例因对照信号不足无法评估。

生存分析

中位随访时间为27.0个月。生存分析显示，Actinin-4 IHC阳性患者的OS和PFS均显著短于IHC阴性患者。经倾向评分加权后，IHC阳性组的OS（HR, 2.76; 95% CI, 1.02–7.45）和PFS（HR, 1.91; 95% CI, 1.03–3.54）劣势依然显著。多变量分析确认Actinin-4 IHC阳性是OS（HR, 3.29; 95% CI, 1.33–8.17; p=0.010）和PFS（HR, 2.21; 95% CI, 1.08–4.53; p=0.030）缩短的独立危险因素。在仅包含常见EGFR突变（Ex19del/L858R）患者的亚组分析中，上述生存差异仍然存在。

疗效反应

根据Actinin-4 IHC和ACTN4 FISH状态分组的疗效分析显示，Actinin-4 IHC阴性组的客观缓解率（ORR）最高，达80%。而Actinin-4 IHC阳性且ACTN4 FISH阳性组的ORR最低（25%），且疾病进展（PD）率高达50%，提示该组患者对奥希替尼的治疗反应最差。游泳图直观展示了不同分组患者的PFS和进展后生存时间，进一步证实了ACTN4 FISH阳性组患者的PFS和OS最短。虽然受限于样本量，ACTN4 FISH阳性组与阴性组之间的OS（中位OS: 5.6个月 vs 24.2个月）和PFS（中位PFS: 2.2个月 vs 10.0个月）差异未达到统计学显著性，但均显示出数值上的缩短趋势。

讨论

本研究首次系统评估了Actinin-4蛋白表达和ACTN4基因扩增在奥希替尼一线治疗EGFR突变NSCLC患者中的预后价值。结果表明，无论是Actinin-4 IHC阳性还是ACTN4 FISH阳性，均与较短的PFS和OS显著相关，提示其可作为识别奥希替尼疗效不佳患者的潜在生物标志物。

Actinin-4作为一种细胞骨架相关蛋白，其过表达和基因扩增已被证实与多种癌症的侵袭、转移等恶性表型相关。本研究结果与既往在早期肺癌中的发现一致，进一步拓展了Actinin-4在晚期肺癌靶向治疗领域的应用前景。随着FLAURA2和MARIPOSA等研究证实奥希替尼联合化疗或amivantamab能进一步改善疗效但伴随毒性增加，精准识别可能从奥希替尼单药治疗中获益有限的患者群体显得尤为重要。相较于TP53/RB1共突变等需要二代测序（NGS）技术检测的复杂生物标志物，Actinin-4的IHC检测方法相对简便、经济，更易于在临床病理科常规开展，具有更好的临床转化潜力。

本研究的局限性包括其回顾性设计、样本量较小，以及未能对所有病例进行FISH验证。此外，观察到的生存差异究竟反映了对奥希替尼的特异性耐药，还是代表了肿瘤本身更具侵袭性的生物学行为，尚需进一步研究阐明。未来需要更大规模的前瞻性研究来验证本研究的结论，并探索Actinin-4阳性患者是否能从奥希替尼联合治疗（如联合化疗）中获得更大益处。

结论

本研究证实，ACTN4基因扩增和Actinin-4蛋白表达是预测EGFR突变非小细胞肺癌患者接受奥希替尼一线治疗预后不良的潜在生物标志物。检测Actinin-4有助于在临床实践中识别可能对奥希替尼单药疗效不佳的患者，从而为这部分患者考虑更积极的初始联合治疗策略提供依据，最终实现个体化精准医疗，改善患者总体生存。