利用γ辐照构建HPRT基因缺失人TK6淋巴母细胞系及其在体细胞突变分析中的应用价值

本研究创新性采用γ射线辐照技术成功构建HPRT基因完全缺失的人TK6淋巴母细胞突变株（TK6LLrrL），通过多重PCR和侧翼STS标记分析验证其大片段缺失特性，为体细胞突变检测提供关键 feeder cells 支持，彰显低LET辐射在基因敲除模型构建中的独特优势。

　　

Highlight

通过γ射线辐照分离HPRT基因完全缺失的人TK6淋巴母细胞系

研究方法

细胞培养与辐照：实验采用印度国家细胞科学中心提供的野生型TK6淋巴母细胞（HPRT⁺，6-TG敏感型）。如图1所示实验流程，父代TK6细胞在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养，接受3Gy剂量γ射线辐照后，通过6-TG筛选获得HPRT基因缺失突变株。

结果

多重PCR分析显示：野生型TK6细胞能同时扩增HPRT基因第2-9外显子（第1外显子单独检测）。从3Gy辐照群体中分离的9个6-TG抗性突变克隆中，有一个克隆（TK6_LLrrL）表现出所有外显子的完全缺失。通过13个侧翼STS标记进一步证实该克隆存在跨越HPRT基因上下游的大片段缺失。该突变株在维持外周血淋巴细胞克隆形成效率方面表现出与亲本细胞相当的 feeder cell 功能。

讨论

γ射线诱导的DNA双链断裂（DSBs）能引起X染色体连锁HPRT基因位点的大片段缺失。本研究成功利用该特性构建了HPRT完全缺失的TK6细胞系，其缺失范围覆盖全部9个外显子。该模型不仅为人类体细胞突变分析提供理想的 feeder cells （避免分子分析中的DNA模板干扰），更为研究HPRT基因在细胞稳态维持中的作用提供了新型工具。该方法可推广至其他细胞类型的基因特异性研究。

结论

本研究证实低LETγ辐射能有效产生基因敲除细胞系。TK6_LLrrL细胞系兼具完整的 feeder cell 功能和HPRT基因完全缺失特性，适用于T淋巴细胞克隆试验中的突变谱分析，为辐射诱导基因缺失机制研究提供了重要模型。