基于错配耐受性LAMP-LFA生物传感器的马MSTN基因g.66493737 T/C变异超便携高特异性检测新方法

本研究开发了一种名为Mr. LAMP-LFA（错配耐受性环介导等温扩增-侧向层析试纸条）的生物传感器，用于单核苷酸多态性（SNPs）的即时检测（POCT）。该传感器通过刚性Mr.系统实现单碱基特异性的高效等温扩增，并集成FTA-NaOH样本制备与LFA信号输出于一体，体积小于5 cm3，重量不足200 g，在无需精密仪器的条件下，实现了对马MSTN基因g.66493737 T/C变异的高灵敏度（检测限7.5×10-4 ng/μL）、高特异性（单碱基区分）及快速检测（<70分钟），为分子育种、食品安全及农业生物安全提供了便携式SNPs检测新策略。

　　

Chemicals and materials

链霉亲和素、抗异硫氰酸荧光素（抗-FITC）抗体、抗地高辛抗体和山羊抗小鼠IgG、乙醇、苯酚、氯仿、氯金酸四水合物（HAuCl₄·4H₂O）、柠檬酸三钠、牛血清白蛋白（BSA）、Tween 20、Triton X-100、氯化钠-柠檬酸钠缓冲液（SSC，20倍浓缩，pH 7.0）和磷酸盐缓冲盐水（PBS，0.01 M，pH 7.4）购自Sigma Chemical Company（圣路易斯，密苏里州，美国）。Taq DNA聚合酶（5 U/mL）、Taq DNA聚合酶PCR

Biosensing Principle

本研究首先采用优化的FTA卡-NaOH方法高效提取基因组DNA。整个提取过程在FTA卡上进行，提取的基因组DNA可直接用于下游扩增。该技术可在25分钟内实现快速提取，且无需专用设备。

随后，如方案1-A所示，提取的DNA用于特异性事件的Mr. LAMP扩增。该

Conclusions

在本研究中，我们证明了Mr. LAMP-LFA生物传感器作为一个有效的去中心化SNPs检测平台，结合了高单碱基特异性和现场便携性。该系统紧凑（<5 cm³）且轻量（<200 g），实现了对马MSTN g.66493737 T/C变异的超灵敏检测（检测限：7.5 × 10^-4 ng·μL^-1），具有宽线性范围（10^-3–1 ng·μL^-1）和快速检测时间（<70分钟），且可在环境条件下进行。其模块化引物设计和全纸基形式使得