基于羊驼纳米抗体的夹心ELISA技术特异性检测鸡肉中肠炎沙门氏菌的创新研究

本文推荐一种基于羊驼纳米抗体（Nb）的夹心ELISA（酶联免疫吸附测定）新方法，用于特异性检测鸡肉中的肠炎沙门氏菌（Salmonella enteritidis）。研究以保守毒力因子SipD蛋白为靶点，筛选出高亲和力纳米抗体Nb3，所建立方法检测限达9.5×104 CFU/mL，且无交叉反应，为食品安全监测提供了新策略。

　　

Highlight

材料与试剂

完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂购自Sigma-Aldrich公司。羊抗羊驼IgG-HRP抗体由Jackson ImmunoResearch Laboratories提供。PCR纯化试剂盒和质粒小提试剂盒购自OMEGA BIO-TEK公司。引物合成由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。限制性内切酶PstI、BstEII、XbaI、EcoRI及T4 DNA连接酶均购自宝生物工程（大连）有限公司。

SipD蛋白的纯化与免疫

为免疫羊驼，本研究通过原核表达系统制备了SipD蛋白。SDS-PAGE分析显示在55 kDa处出现蛋白条带（图2A），与SipD预期分子量一致。以肠炎沙门氏菌感染鸡血清作为一抗进行Western blot分析，结果显示重组SipD蛋白能特异性结合阳性血清（图2B），表明其具有良好的抗原性和免疫反应性。

讨论

肠炎沙门氏菌是全球食源性疾病的主要病原体之一，每年导致数百万感染病例，严重时可致命。禽类产品（如鸡蛋、鸡肉和肝脏）因加工和运输过程中的交叉污染风险高，成为传播肠炎沙门氏菌的重要媒介。因此，开发快速、准确的检测方法对于保障食品安全和公共卫生至关重要。

结论

本研究通过免疫成年雄性羊驼，成功构建了靶向肠炎沙门氏菌SipD蛋白的噬菌体展示文库，经过四轮淘选筛选出两种特异性纳米抗体Nb3和Nb89。两种纳米抗体通过原核表达系统成功表达纯化，展现出优异的结合活性、热稳定性和特异性。进一步利用产量更高的Nb3开发了夹心ELISA方法，为禽产品中肠炎沙门氏菌的检测提供了新工具。