百里香醌通过PKR/ATF4/CHOP信号通路和自噬调控抑制病毒模拟物诱导的肺泡上皮细胞应激

本研究揭示了百里香醌在肺泡上皮细胞中的新型保护机制。研究发现，百里香醌能够通过抑制PKR/eIF2α/ATF4/CHOP应激信号通路、调节自噬过程和降低活性氧（ROS）水平，有效缓解病毒模拟物Poly(I:C)诱导的细胞应激，为呼吸道病毒感染的治疗提供了新的潜在靶点。

　　

研究亮点

细胞培养

ATII细胞购自Celprogen（货号：36076-05），按照制造商说明进行培养。细胞在含血清的人（II型）肺泡原代细胞完全培养基（Celprogen，货号：M36076-05S，美国）中扩增，并添加1% L-谷氨酰胺和1%青霉素-链霉素（Gibco，美国）以防止污染。培养物在37°C、5% CO₂的湿润环境中使用标准25 cm² T型瓶（Corning，美国）维持。每2-3天更换培养基，细胞达到80-90%融合时进行传代。

百里香醌和Poly(I:C)对ATII细胞的细胞毒性

为评估百里香醌和Poly(I:C)的细胞毒性特征，将ATII细胞暴露于不同浓度的化合物中24小时，采用台盼蓝排斥法测定细胞活力（图1A-B）。百里香醌诱导了浓度依赖性的细胞活力降低。值得注意的是，≥10 μM的浓度与未处理对照组相比产生统计学显著的细胞毒性（p < 0.05，图1A）。相比之下，Poly(I:C)在测试浓度范围内表现出较温和的细胞毒性。

讨论

本研究揭示了百里香醌在调节dsRNA诱导的ATII细胞应激反应中的新作用。具体而言，百里香醌显著减弱了病毒dsRNA模拟物poly(I:C)触发的PKR/ATF4/CHOP信号轴的激活。这一发现具有重要意义，因为PKR是病毒RNA的关键胞质传感器，可磷酸化eIF2α并驱动整合应激反应，最终导致ATF4和CHOP的上调（Kolac等，2023b）。在我们的实验中，百里香醌处理显著降低了PKR磷酸化及其下游靶点eIF2α的磷酸化水平。这随后导致ATF4和CHOP蛋白表达的降低，表明百里香醌可能通过干扰PKR激活来减弱整合应激反应。