结核潜伏感染诊断新靶点探索及PB2-DIMQ亚单位疫苗免疫效力研究

本综述系统评估了五种MTB休眠期高表达抗原（Rv0470c/Rv2026c/Rv2466c/Rv3334/Rv3406）在潜伏结核感染（LTBI）诊断中的价值，并创新性开发了融合抗原PB2（Rv0470c-Rv1846c）与复合佐剂DIMQ（DDA+IMQ）构建的亚单位疫苗。研究证实抗原群对MTB感染诊断具高灵敏度（AUC=0.7415-0.9556），而PB2-DIMQ疫苗通过激活TLR7-MyD88/MAPK通路诱导强效Th1免疫应答，为结核病精准诊断与疫苗研发提供新策略。

　　

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菌株与质粒

MTB H37Rv标准株和BCG-Danish（1331）（安徽朝阳医院）；大肠杆菌（E. coli）DH5α（克隆宿主）和BL21(DE3)（表达宿主）（生工生物）；原核表达载体pET-28a/30b/32a(+)（诺唯赞）。

主要试剂

异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）（Sigma）；镍柱亲和层析柱、His标签小鼠单抗及HRP标记羊抗鼠IgG/IgG1/IgG2a（生工生物）；内毒素去除试剂盒（金斯瑞）。

重组蛋白的表达、纯化与鉴定

成功实现七种重组蛋白的高效表达。溶解度分析显示重组蛋白主要存在于包涵体。SDS-PAGE显示所有蛋白纯度良好（图2A），分子量与理论预测基本一致：Rv0470c（40 kDa）、Rv2026c（41 kDa）、Rv2466c（45 kDa）、Rv3334（32 kDa）、Rv3406（53 kDa）、Rv1846c（15 kDa）和融合蛋白PB2（55 kDa）。Western blot分析证实...

讨论

本研究旨在探讨五种MTB抗原（Rv0470c/Rv2026c/Rv2466c/Rv3334/Rv3406）在结核病鉴别诊断中的潜在应用，并初步探索新型亚单位疫苗PB2-DIMQ的免疫原性与保护效力。诊断方面，尽管这些抗原区分活动性结核（ATB）与潜伏感染（LTBI）的判别力有限（AUC=0.6622-0.7473），但其作为MTB感染诊断标志物展现出显著潜力（AUC=0.7415-0.9556）。疫苗研究中，PB2-DIMQ在初免-加强策略下诱导出比BCG更强的Th1型免疫应答，促进多功能T细胞（CD4⁺/CD8⁺ IFN-γ⁺ IL-2⁺）扩增并增强体外抑菌能力，为结核病防控提供新思路。

作者贡献声明

周明明：可视化，调查，数据整理。刘新矿：调查，资金获取。徐云：项目管理，方法论，调查，概念设计。王润林：形式分析，数据整理，概念设计。王小春：写作-审阅编辑，可视化，项目管理，概念设计。钟强森：写作-初稿，验证，项目管理，方法论，调查，形式分析，数据整理...

数据可用性声明

本研究结果的相关数据可向通讯作者索取。

伦理声明

参与本实验的志愿者均已签署知情同意书，研究经安徽理工大学附属肿瘤医院委员会批准。动物实验经安徽理工大学动物实验委员会批准（编号GZ2022-003），动物护理符合机构准则。

利益冲突声明

作者声明无已知竞争性财务利益或个人关系影响本研究。

资金支持

本研究由安徽理工大学第一附属医院资助（批准号YZ2023H2C006）。

致谢

感谢淮南朝阳医院提供H37Rv菌株，特别感谢安徽理工大学附属肿瘤医院在流式细胞实验与数据分析方面的技术支持。