靶向NET介导小胶质细胞活化：丁苯酞延长尿激酶溶栓时间窗并抑制出血转化的机制研究

《Experimental Hematology》：Dl-3-n-butylphthalide reduces urokinase-induced hemorrhagic transformation after stroke by targeting NET-mediated microglial activation

本研究针对尿激酶(UK)超时间窗溶栓易引发出血转化(HT)的临床难题，探讨了丁苯酞(NBP)通过抑制中性粒细胞胞外诱捕网(NET)形成及小胶质细胞M1极化，延长UK治疗时间窗至9小时的作用机制。实验证实NBP可缓解UK诱导的血脑屏障损伤，为卒中联合用药提供新依据。

　　

急性缺血性卒中（AIS）的溶栓治疗是一场与时间的赛跑。尿激酶（UK）作为临床常用溶栓药物，其疗效具有严格的时间限制——发病后6小时内使用可有效溶解血栓，但超过这一时间窗则可能显著增加脑出血风险，即出血转化（HT）。这一矛盾严重限制了UK的临床应用。令人振奋的是，临床观察发现丁苯酞（NBP）与UK联用能改善患者神经功能缺损，但其背后的科学机制如同一团迷雾，亟待揭示。为此，发表于《Experimental Hematology》的这项研究深入探索了NBP如何为UK的“治疗时间窗”扩容，并化解其出血风险。

本研究主要运用了以下关键技术方法：在体水平采用栓塞型大脑中动脉闭塞（eMCAO）大鼠模型模拟卒中，并给予不同时间点的UK和NBP干预；离体水平从eMCAO大鼠分离中性粒细胞，观察UK诱导的NET形成及NBP的抑制作用；同时利用中性粒细胞条件培养基与氧糖剥夺（OGD）模型下的微glia共培养体系，探讨NETs对微glia极化的影响。

NBP延长UK治疗时间窗并抑制HT

通过eMCAO大鼠模型，研究人员发现，在卒中发作后9小时这一通常已超出安全范围的时间点，单独使用UK（100,000 U/kg）会诱发严重的HT。然而，若在此时间点联合应用低剂量NBP（2.5 mg/kg），则能显著减轻UK导致的脑出血，成功将UK的有效治疗时间窗从6小时延长至9小时。这一现象提示，NBP可能通过保护血脑屏障（BBB）的完整性，来对抗UK的副作用。

NBP抑制UK诱导的NET形成

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是中性粒细胞释放的以DNA为骨架的网状结构，在血栓形成和炎症中扮演重要角色。离体实验发现，UK（2000 U/mL）能够强烈激活来源于eMCAO大鼠的中性粒细胞，导致大量NETs产生。而NBP（10, 100 μM）则以浓度依赖的方式有效抑制了UK诱导的NET形成。这表明，NBP可能是通过靶向调控中性粒细胞的功能，来干预HT进程。

NBP缓解NETs介导的微glia M1极化

微glia是脑内的免疫细胞，其向促炎的M1表型极化会加剧神经炎症和脑损伤。为了模拟体内复杂的细胞间相互作用，研究人员将UK处理过的中性粒细胞条件培养基（其中富含NETs成分）加入到经历氧糖剥夺（OGD）的微glia培养体系中。结果发现，该条件培养基能强力驱动微glia向有害的M1表型转化。而NBP的干预则显著减轻了这种促炎极化效应。这清晰地表明，NBP可能是通过抑制UK诱导的NETs生成，进而切断了NETs驱动微glia过度活化的通路。

综上所述，本研究揭示了丁苯酞（NBP）在缺血性卒中治疗中的一个新颖且重要的机制：通过靶向抑制尿激酶（UK）所诱导的中性粒细胞胞外诱捕网（NET）形成，进而阻断了NETs对小胶质细胞M1极化的促进作用，最终减轻了血脑屏障损伤和出血转化（HT）风险，成功将UK的溶栓治疗时间窗延长至9小时。这项研究不仅从免疫炎症角度阐明了NBP与UK协同作用的深层原理，为临床联合用药提供了坚实的药理学依据，也为解决溶栓治疗中的出血风险这一世界性难题提供了新的策略和靶点。