基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap技术探究山羊奶中三磷酸腺苷（ATP）含量与稳定性的新方法

《International Dairy Journal》：Investigating the content and stability of adenosine triphosphate in goat milk via ultra-performance liquid chromatography combined with tandem Q-Exactive Orbitrap mass spectrometry

本研究开发了一种结合弱阴离子交换（WAX）柱纯化与超高效液相色谱-串联Q-Exactive Orbitrap质谱（UPLC-Q-Exactive）的新方法，可在3分钟内实现山羊奶中三磷酸腺苷（ATP）及其代谢物（ADP、AMP）的高灵敏度同步检测（检出限达1 ng/mL），为乳制品质量监控与功能成分研究提供了关键技术支撑。

　　

Highlight

优化色谱条件

为优化山羊奶中ATP的色谱分离效果，我们评估了GOLD aQ、BEH Amide、HSS T3和C₁₈四种UPLC色谱柱在不同洗脱条件下的表现（详见表1）。每种色谱柱在不同洗脱方法下各有优劣：GOLD aQ柱在所有测试条件下均未出现目标化合物检测峰；BEH Amide柱可通过等度洗脱实现分离，但目标物峰形较差；HSS T3柱在梯度洗脱下可实现基线分离，但分析时间超过6分钟；而C₁₈柱在甲醇-10 mM乙酸铵水溶液梯度洗脱条件下，仅用3分钟即实现ATP、ADP和AMP的基线分离，且峰形尖锐对称，故最终选择C₁₈柱进行后续分析。

结论

本研究建立了山羊奶中ATP及其代谢物（ADP和AMP）的提取纯化方法与UPLC-Q-Exactive检测技术。通过优化提取、纯化及色谱分离流程，可在3分钟内完成三种化合物的检测，并探究了ATP在山羊奶中的稳定性。经验证，该方法在实际样品检测中表现准确、简便、可靠，不仅为山羊奶质量安全监测技术体系提供了重要补充，也为后续山羊奶功能成分活性保留研究奠定了方法学基础。