锌指蛋白Zfp335通过调控Lmnb1介导T细胞稳态增殖的新机制

《Cell & Bioscience》：Zinc finger protein Zfp335 is required for T cell homeostatic proliferation through regulating Lmnb1

本研究针对T细胞稳态维持的分子机制尚不明确的问题，揭示了锌指蛋白Zfp335在T细胞稳态增殖中的关键作用。研究人员通过体内外实验证实Zfp335缺失会显著抑制初始T细胞的稳态增殖，并通过RNA测序和双荧光素酶报告基因实验发现Zfp335直接结合Lmnb1基因启动子调控其转录。Lmnb1过表达可显著挽救Zfp335-/- T细胞的增殖缺陷，为理解T细胞稳态调控提供了新视角。

　　

在免疫系统中，T细胞作为适应性免疫的核心成员，其数量稳定对机体免疫功能至关重要。成熟T细胞迁移至外周淋巴器官后，通过稳态增殖维持细胞群体稳定，这一过程主要受TCR/自身pMHC复合物和白细胞介素7（IL-7）信号通路的调控。然而，除了这些已知信号通路外，参与T细胞稳态维持的细胞内分子及其具体机制仍有大量未知领域亟待探索。

锌指蛋白335（Zfp335）作为重要的转录因子，在胸腺细胞发育、效应T细胞分化等过程中发挥关键作用，但其在外周T细胞稳态维持中的功能尚不明确。为此，杨彪等研究人员在《Cell & Bioscience》上发表了最新研究成果，系统揭示了Zfp335通过直接调控Lmnb1表达参与T细胞稳态增殖的新机制。

研究人员首先发现，在稳态条件下外周T细胞中Zfp335表达显著上调。通过建立适应性转移模型，他们观察到Zfp335缺失导致T细胞稳态增殖能力严重受损，但细胞存活未受影响。体外实验进一步证实，Zfp335缺失显著抑制了IL-7诱导的T细胞增殖。

为探究机制，研究人员通过RNA测序分析发现Zfp335缺失主要影响细胞周期相关基因的表达。通过生物信息学分析和实验验证，他们发现Zfp335可直接结合Lmnb1基因启动子区域并调控其转录。更重要的是，Lmnb1过表达能够显著挽救Zfp335缺失导致的T细胞增殖缺陷。

主要关键技术方法包括：通过流式细胞术分析T细胞表型和增殖；建立适应性转移模型研究体内T细胞稳态；利用体外培养系统评估IL-7诱导的增殖；采用RNA测序进行转录组分析；通过双荧光素酶报告基因实验验证Zfp335与靶基因启动子的结合；构建骨髓嵌合小鼠模型进行功能挽救实验。

研究结果：

Zfp335在外周T细胞稳态过程中表达上调

研究人员通过适应性转移实验发现，与新鲜分离的初始T细胞相比，经历稳态过程的T细胞中Zfp335表达显著升高。同时，外周淋巴结中CD3⁺CD44^-CD62L⁺ T细胞的Zfp335平均荧光强度也明显高于胸腺T细胞，提示Zfp335可能参与T细胞稳态调控。

Zfp335缺失抑制体内T细胞稳态增殖

通过将野生型（WT）和Zfp335条件性敲除（KO）小鼠的初始T细胞按1:1比例共同转移至亚致死剂量照射的受体小鼠，7天后发现KO组CD4⁺和CD8⁺ T细胞比例显著降低。细胞凋亡分析显示两组细胞凋亡率无显著差异，但CTV增殖追踪表明KO组T细胞分裂程度明显低于WT组，证实Zfp335缺失特异性影响T细胞增殖而非存活。

Zfp335缺陷损害体外T细胞增殖能力

为排除体内环境复杂性，研究人员建立了体外共培养系统。将WT和KO初始T细胞用CTV标记后与抗原呈递细胞及IL-7共培养，结果显示KO组T细胞未分裂比例显著高于WT组，而已分裂细胞比例明显降低，进一步证实Zfp335缺失直接导致T细胞增殖缺陷。

Zfp335直接调控Lmnb1转录

RNA测序分析显示，Zfp335缺失主要影响细胞周期相关通路。通过交叉分析RNA测序数据、HALLMARK通路和Zfp335 ChIP-seq数据，研究人员筛选出15个候选靶基因。双荧光素酶报告基因实验证实Zfp335可直接结合Lmnb1启动子并激活其转录。

Lmnb1过表达挽救Zfp335缺失T细胞的增殖缺陷

通过构建Lmnb1过表达的骨髓嵌合小鼠，研究人员发现Lmnb1过表达可显著改善Zfp335缺失CD4⁺和CD8⁺ T细胞的增殖能力，几乎恢复至WT水平，证明Zfp335通过调控Lmnb1表达影响T细胞稳态增殖。

本研究首次揭示了Zfp335-Lmnb1轴在T细胞稳态增殖中的关键作用。研究表明，Zfp335不依赖于经典的STAT5信号通路，而是通过直接调控Lmnb1表达来促进T细胞稳态增殖。这一发现不仅拓展了对T细胞稳态调控机制的认识，也为理解Zfp335在T细胞生物学中的多重功能提供了新视角。考虑到Zfp335在胸腺发育、效应T细胞分化和调节性T细胞功能中的重要作用，该研究为全面认识Zfp335在免疫系统中的核心地位奠定了重要基础。