富硒抹茶通过调控细胞色素P450表达改善酒精性肝损伤的作用及机制研究

《Food Frontiers》：Selenium-Enriched Matcha Ameliorates Alcohol-Induced Liver Injury by Modulating Cytochrome P450 Expression in Mice

本研究系统探讨了富硒抹茶（硒含量0.27 mg/kg）对酒精诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其机制。通过无标记蛋白质组学技术，发现富硒抹茶干预可显著降低血清ALT、AST、TG、TC、TBIL和MDA水平，提升SOD、GSH-Px和GSH活性，并下调细胞色素P450（Cyp2c40和Cyp2c54）表达，调控化学致癌-DNA加合物、花生四烯酸和视黄醇代谢通路，为富硒抹茶在酒精性肝损伤干预中的应用提供了理论依据。

　　

引言

酒精摄入是全球范围内导致肝损伤的主要风险因素之一，长期或过量饮酒可引发肝炎、纤维化、肝硬化甚至肝癌。尽管现代医药技术取得显著进展，酒精性肝损伤的有效治疗方法仍较为有限。天然产物因其潜在的肝保护活性受到广泛关注，其中富硒抹茶作为一种新型茶制品，富含儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、L-茶氨酸（LTA）及有机硒等生物活性成分，具备抗氧化、抗炎和免疫调节功能。本研究旨在系统评估富硒抹茶对酒精诱导肝损伤的保护作用，并首次通过无标记蛋白质组学技术探讨其分子机制。

材料与方法

富硒抹茶由陕西紫阳县某茶业公司提供，硒含量为0.27 mg/kg，符合中国富硒食品标准（NY/T 600-2002）。实验采用48只BALB/c雄性小鼠，随机分为6组：阴性对照组（NC）、酒精模型组（AM）、阳性对照组（PC，水飞蓟素50 mg/kg体重）、低剂量富硒抹茶组（SML，250 mg/kg体重）、中剂量组（SMM，500 mg/kg体重）和高剂量组（SMH，750 mg/kg体重）。各组连续灌胃28天后，AM组及干预组给予56%二锅头白酒诱导肝损伤，NC组给予蒸馏水。12小时后采集血清和肝脏组织，检测硒分布、生化指标、氧化应激参数及组织病理学变化。蛋白质组学分析采用UPLC-MS/MS技术，结合GO、KEGG和PPI网络分析差异表达蛋白（DEPs）。

结果

3.1 富硒抹茶中生物活性成分含量

富硒抹茶中检测到6种酚类化合物，其中儿茶素（CA）含量最高（130.09 mg/g），其次为表儿茶素没食子酸酯（ECG，25.45 mg/g）和表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG，21.33 mg/g）。L-茶氨酸（LTA）含量为48.54 mg/g，咖啡因为1.45 mg/g。

3.2 硒在小鼠器官组织中的分布

富硒抹茶干预后，小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、血清和肌肉中的硒含量显著高于NC和AM组（p < 0.05），且肝脏硒积累量最高（105.56–241.67 ng/g），呈现剂量依赖性增加。

3.3 一般行为、体重与肝脏指数

酒精暴露导致小鼠出现嗜睡和翻正反射消失，富硒抹茶干预显著缩短这些行为异常持续时间。各组间体重无显著差异（p > 0.05），但AM组肝脏重量和肝脏指数显著升高（p < 0.01），中高剂量干预组（SMM、SMH）则显著降低（p < 0.05）。

3.4 血清生化指标

AM组血清ALT、AST、TG、TC和TBIL水平显著升高（p < 0.05），富硒抹茶干预后这些指标呈剂量依赖性下降，SMH组接近NC组水平（p > 0.05）。

3.5 肝脏氧化应激参数

酒精暴露导致肝脏SOD、GSH-Px活性和GSH含量显著降低（p < 0.01），MDA水平升高（p < 0.01）。富硒抹茶干预后，SOD、GSH-Px活性和GSH含量剂量依赖性回升，MDA积累减少。

3.6 肝脏组织病理学

NC组肝细胞结构完整，细胞质饱满，核仁清晰，无脂肪空泡。AM组出现大量脂肪空泡、炎性细胞浸润及肝索排列紊乱。富硒抹茶干预组肝细胞结构基本完整，脂肪空泡和炎性细胞显著减少。

3.7 蛋白质组学与生物信息学分析

共鉴定出376个DEPs（179个下调，197个上调），其中35个关键DEPs与酒精性肝损伤密切相关。GO分析显示DEPs主要参与脂质代谢、胆固醇转运等生物过程，涉及低密度脂蛋白颗粒、抗氧化活性等细胞组分和分子功能。KEGG富集分析表明，DEPs显著富集于视黄醇代谢、化学致癌-DNA加合物、花生四烯酸代谢、细胞色素P450代谢等通路。PPI网络分析提示Cyp2c40和Cyp2c54为核心节点蛋白。

3.8 关键通路与分子机制

富硒抹茶显著下调Cyp2c40和Cyp2c54表达，这两个细胞色素P450酶主要参与化学致癌-DNA加合物形成、花生四烯酸和视黄醇代谢。酒精摄入通过上调细胞色素P450促进乙醇转化为乙醛，诱发氧化应激和脂质过氧化，而富硒抹茶通过抑制Cyp2c家族表达，减少活性氧（ROS）积累和乙醛-蛋白加合物形成，从而缓解肝损伤。

讨论

富硒抹茶的肝保护作用归因于其多组分协同效应：酚类化合物（如EGCG、CA）通过调节TLR2/3和IL-10减轻炎症；LTA增强自由基清除能力；有机硒通过硒蛋白（如GSH-Px）提升抗氧化防御。蛋白质组学进一步揭示其核心机制为调控细胞色素P450介导的代谢通路，尤其是Cyp2c40和Cyp2c54相关的DNA加合物、花生四烯酸和视黄醇代谢紊乱的纠正。本研究为富硒抹茶作为功能性食品预防酒精性肝损伤提供了分子证据。

结论

富硒抹茶通过多靶点作用缓解酒精性肝损伤，包括改善肝细胞结构、调节脂质代谢、增强抗氧化能力，并下调细胞色素P450（Cyp2c40和Cyp2c54）表达以干预关键代谢通路。其活性成分（酚类、LTA和硒）的协同效应为其在营养干预和肝健康产品开发中的应用提供了理论基础。