猪圆环病毒2b型（PCV2b）人工感染性颗粒在睾丸细胞中的实验性合成及其生物技术应用潜力

《Journal of Virological Methods》：Experimental production of synthetic infectious porcine circovirus 2b particles in swine testicular cells

本研究通过将人工设计的PCV2b基因组转染至猪睾丸（ST）细胞，成功合成具有感染性的病毒颗粒，为开发新型疫苗候选株及诊断试剂提供了关键技术平台，推动了对圆环病毒（PCV）生物学特性与致病机制的研究。

　　

Highlight

野生型PCV2b基因组的基因分型与测序

本研究所用合成PCV2b基因组序列源于野外血清样本的野生型基因组序列，该样本通过IBTEC（圣保罗州立大学生物技术研究所）的诊断服务获得。基因分型采用Opriessnig等人（2010）描述的单重定量PCR（qPCR）方法，使用PCV2b探针及PCV2正义与反义引物（表S1，补充材料）。反应条件包括GoTaq?探针

Genotyping and sequencing of the wild type PCV2b genome

本项目使用的野生型PCV2b序列全长1767个碱基对，与参考序列（GenBank登录号KF374705.1）完全匹配。全局比对显示两者具有98.08%的一致性（图3），并确认了每个开放阅读框（ORF）的最小和最大位置坐标、大小及方向（表S2，补充材料）。对野生型PCV2b基因组序列的分析表明，其不包含NdeI酶的酶切位点。这使得

Discussion

由于PCV基因组微小且编码能力有限，这类病毒依赖宿主酶和因子完成其复制周期（Tang等人，2013）。这一特性在PCV1需要猪肾细胞（PK-15）处于细胞周期S期才能完成感染过程的现象中进一步凸显（Tischer等人，1987）。因此，在使用PK-15细胞或其他细胞系（如猪睾丸（ST）细胞）进行PCV2病毒分离的方案中，

Conclusion

这些实验的结果提供了强有力的证据，表明通过合成基因组转染，在猪睾丸（ST）细胞中实验性生产具有感染性的合成PCV2b病毒颗粒是成功的。在转染和感染实验中，细胞传代对于维持大量PCV2b病毒拷贝至关重要。通过ELISA和电镜分析，分别证实了PCV2b抗原的存在及其特征性形态结构，