MRSA增强血小板聚集与血浆凝固能力——耐药菌株的新毒力特征及其血栓并发症机制研究

《Thrombosis Journal》：Enhanced platelets aggregation and coagulation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus compared to methicillin-sensitive Staphylococcus aureus

本研究针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是否比甲氧西林敏感菌株(MSSA)具有更强的促凝血和血小板激活能力这一科学问题，通过表型与基因型鉴定的75株临床分离株（含MRSA、MSSA及凝固酶阴性葡萄球菌CoNS），系统评估了细菌对人类血浆凝固功能（PT、PTT、TT、CT）和血小板聚集功能的影响。结果发现MRSA菌株能显著加速血浆凝固（PT：7.2±1.2 s vs. 10.5±2 s, P<0.0001）并增强血小板聚集（最大振幅43.00±39.93% vs. 35.35±27.06%, P<0.0001），提示其可能通过增强凝血-血小板交互作用加剧感染中的血栓并发症并影响抗生素疗效。该研究为MRSA高毒力机制提供了新证据，并为抗凝/抗血小板辅助治疗策略提供了理论依据。

　　

在抗生素耐药性日益严峻的全球公共卫生挑战中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染因其高死亡率及治疗难度备受关注。尽管已知金黄色葡萄球菌可通过分泌凝固酶(Coa)和von Willebrand因子结合蛋白(vWbp)激活凝血系统，并通过表面蛋白（如ClfA、FnBPA）直接激活血小板，但MRSA菌株是否因耐药性获得更强的凝血与血小板激活能力仍属未知。这一问题对理解MRSA感染易并发血栓性疾病（如弥散性血管内凝血、感染性心内膜炎相关栓塞）的临床现象具有重要价值。

为系统比较MRSA与MSSA菌株的凝血和血小板激活能力，Mohammad Al-Tamimi和Nisreen Himsawi团队对经表型（包括头孢西丁药敏试验）和基因型（mecA、coa基因检测）确证的75株细菌分离株（含25株MRSA、25株MSSA及25株CoNS）展开研究。所有实验均采用健康捐赠者的人类血浆及富血小板血浆(PRP)，通过手动与自动化检测方法平行分析血浆凝固参数（包括凝血酶原时间PT、部分凝血活酶时间PTT、凝血时间CT及凝血酶时间TT）及血小板聚集功能（通过血小板计数减少率及光比浊法聚集仪测量最大振幅、斜率、曲线下面积等参数）。研究还评估了PT/PTT试验对凝固酶阳性菌(CoPS)与凝固酶阴性菌(CoNS)的鉴别诊断价值。

关键技术方法包括：1）使用经表型（包括Vitek 2系统）和基因型（mecA、coa、vanA/vanB基因）鉴定的临床及鼻腔来源菌株；2）通过手工法（试管凝固酶试验、PT/PTT/CT）与全自动凝血分析仪（PT/PTT/TT）双轨评估血浆凝固功能；3）通过全自动血细胞分析仪（血小板计数减少法）和光学聚集仪（CHRONO-LOG?）量化血小板聚集能力；4）以胶原蛋白（1μg/mL）和肾上腺素（5μM）为阳性对照，评估聚集参数（最大振幅、斜率、滞后时间等）。

细菌菌株特征

所有菌株均通过革兰染色、生化试验（如过氧化氢酶、凝固酶）及分子检测（mecA、coa基因）确认分类。MRSA菌株均携带mecA基因且对头孢西丁耐药，所有菌株对万古霉素敏感且未检出vanA/vanB基因。

凝固酶试验结果

试管凝固酶试验显示，所有CoPS（包括MRSA与MSSA）均能诱导血浆凝固，而CoNS菌株即使在24小时后仍无凝固现象。值得注意的是，MRSA菌株的凝固出现时间显著短于MSSA（CT：84±117.2分钟 vs. 148.3±195分钟, P<0.0001），且形成的凝块更为坚实。

血浆凝固功能分析

手动凝血检测表明，MRSA菌株处理的血浆PT值（7.2±1.2秒）显著低于MSSA（10.5±2秒, P<0.0001）和CoNS（16±2秒）；PTT（16.1±1.5秒 vs. 23.8±2秒）和CT（84±117.2分钟 vs. 148.3±195分钟）均呈现相同趋势（P<0.0001）。全自动凝血分析仪进一步验证了MRSA在PT（6.8±1.3秒）、PTT（17.2±1.5秒）和TT（7.3±1.1秒）上均显著低于MSSA（P<0.0001），提示MRSA可能通过内外源性凝血通路共同加速凝固过程。

血小板聚集功能评估

通过全自动血细胞分析仪检测发现，MRSA菌株可导致血小板计数显著降低（90.3±35.9 vs. MSSA的121.1±42.6, P<0.001），提示其诱导血小板聚集能力更强。光学聚集仪进一步显示，MRSA处理组的聚集最大振幅（43.00±39.93%）、斜率（24.95±17.56%/分钟）及曲线下面积（396.86±529.86）均显著高于MSSA组（P<0.0001），而聚集滞后时间（0.51±0.99分钟）显著缩短（P=0.003）。

PT/PTT试验的诊断价值

以临床常规参考范围（PT:11-13秒, PTT:25-35秒）为基准，PT试验区分CoPS与CoNS的敏感性和特异性分别达100%和98%，而PTT试验的特异性较低（84%）。PT试验可完全区分MRSA与CoNS（敏感度、特异性、阳性/阴性预测值均为100%），但对MRSA与MSSA的鉴别能力有限。

本研究首次在大量临床分离株中证实MRSA菌株具有较MSSA更强的促凝血与血小板激活能力。该特性可能通过多种机制增强MRSA毒力：加速纤维蛋白包裹形成物理屏障以阻碍抗生素渗透；通过血小板-细菌聚集体促进细菌播散；增加感染相关血栓并发症（如弥散性血管内凝血）风险。研究还提出PT作为快速鉴别CoPS与CoNS的实用诊断工具，为感染病原的初步筛查提供了新思路。这些发现为MRSA感染中联合抗凝/抗血小板治疗提供了理论依据，并提示凝血-血小板系统可能成为遏制耐药菌感染的新靶点。