利用CRISPR/Cas9基因编辑技术快速构建RPGR基因敲除比格犬模型——为眼科疾病治疗研究提供新型大动物模型

《Experimental Cell Research》：A Novel X-linked Retinitis Pigmentosa Beagle Dog Model for Ophthalmic Research Established Rapidly by Editing the RPGR Gene in Zygotes

本研究通过CRISPR/Cas9基因编辑技术结合多向导RNA（gRNA）及受精卵显微注射，成功构建了稳定遗传的X连锁视网膜色素变性（XLRP）比格犬模型。该模型填补了大动物模型空白，表现出典型的视网膜光感受器功能进行性恶化、外核层变薄等特征，为基因治疗（如AAV载体）和干细胞移植等干预策略的时机与剂量研究提供了理想平台。

　　

亮点

我们成功通过CRISPR/Cas9基因编辑工具结合多向导RNA（gRNA）和受精卵显微注射技术，一步法高效构建了稳定遗传的RPGR基因敲除比格犬模型。两只F0代比格犬在RPGR基因上表现出高敲除效率，其中F0雌性犬展现出典型的XLRP表型，包括视杆细胞和视锥细胞功能进行性恶化、外核层厚度从7月龄至35月龄逐渐减少、视网膜动脉变细伴色素沉着轻微。值得注意的是，F1代半合子RPGR基因敲除的雄性比格犬在7月龄时即表现出更明显的疾病表型。

结论

我们成功构建了具有中等疾病发病特征的稳定遗传XLRP比格犬模型，该模型非常适用于基因治疗和干细胞移植的治疗研究，以确定最佳干预时机和治疗剂量。