微滴式数字PCR技术提升牛病毒性腹泻病毒检测效能的创新研究及其在疫病防控中的应用价值

《Brazilian Journal of Microbiology》：Droplet digital PCR (ddPCR) for enhanced detection and quantification of bovine viral diarrhea virus (BVDV): A promising tool for disease control

本研究针对牛病毒性腹泻病毒（BVDV）检测灵敏度不足的难题，通过对比常规PCR、实时荧光定量PCR与新一代微滴式数字PCR（ddPCR）技术，发现ddPCR的检测灵敏度达到0.24拷贝/μL（286.3×10-6 ng/μL），较传统方法提升一个数量级。该技术为BVD血清池和奶罐样本筛查提供了高灵敏度、高特异性的解决方案，对遏制免疫耐受性持续感染（PI）动物传播病毒具有重要意义。

　　

牛病毒性腹泻（BVD）对养牛业的生产繁殖造成显著影响，并引发畜牧业重大经济损失。其病原体为黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）病毒，该病毒呈全球分布，在南美牛群中感染率高达60–85%。该疾病的重要特征是可导致免疫耐受动物（持续感染-PI）的产生，这些动物难以被检测且会向环境中大量排毒，成为病毒传播的主要源头。早期检测对于实施有效的疫病控制计划至关重要。本研究将传统分子技术（常规PCR与实时荧光定量PCR）与最新一代的微滴式数字PCR（ddPCR）进行对比，发现ddPCR在检测与定量BVDV方面具有显著优势。实验采用46份经常规PCR检测过的牛血清样本（含阴阳性结果），同时以NADL BVDV参考毒株和合成质粒作为阳性对照，无模板对照作为阴性对照。结果显示，ddPCR对NADL BVDV参考毒株的检测限（Limit of Detection）低至0.24拷贝/μL（286.3×10^-6 ng/μL），灵敏度比以往方法提高一个数量级。研究表明，微滴式数字PCR是一种具备高灵敏度、高特异性和良好重复性的可靠技术，在利用血清池或大罐奶样进行BVD防控计划中具有重要应用价值。