EBV亚型在树鼩体内感染性差异研究：揭示1型与2型EBV的致病机制分化

《Virology Journal》：Comparative infectivity of EBV subtypes in tree shrews (Tupaia belangeri)

本研究针对EBV亚型感染机制不清的问题，通过树鼩模型开展T1与T2亚型EBV的感染性比较研究。结果显示T1 EBV在树鼩体内呈现高感染率（6/6）和持续感染特性（28天仍可检测），而T2 EBV仅短暂检出（1/6）。转录组分析发现T1感染主要激活炎症通路（TNF/NF-κB），T2仅引起轻微转录改变。该研究为EBV亚型致病差异提供了首个树鼩模型证据，对EBV相关疾病防治具有重要参考价值。

　　

在全球范围内，Epstein-Barr病毒（EBV）感染率超过90%，这种普遍存在的γ疱疹病毒与传染性单核细胞增多症、伯基特淋巴瘤、鼻咽癌和胃癌等多种疾病的发生密切相关。根据EBNA2基因序列的差异，EBV被分为1型（T1）和2型（T2）两种主要亚型。尽管T1 EBV在全球广泛分布，但T2 EBV在特定地区如南部非洲呈现地方性流行，感染率约为25%。近年来的流行病学调查显示，T2 EBV的感染范围可能比以往认知的更广，例如在英国大学生中约有20%的血清阳性率，而在西班牙多发性硬化患者中，T1和T2 EBV共感染比例高达90%。

EBV亚型在感染特性上存在显著差异。与T1 EBV相比，T2 EBV在体外感染和转化静息B细胞的能力较弱，但表现出独特的T细胞嗜性。这种差异可能源于EBNA2蛋白第442位氨基酸的改变（T1为丝氨酸，T2为天冬氨酸），影响了其与ETS-IRF复合元件（EICE）的结合能力，进而调控LMP1启动子的活性。尽管T2 EBV在体外转化效率较低，却在地方性伯基特淋巴瘤中频繁检出，提示其在体内可能通过其他机制维持感染。

EBV研究面临的主要挑战在于其严格的物种特异性，大多数动物对EBV不易感，限制了体内感染特性和致病机制的深入研究。树鼩作为一种新兴的小型实验动物模型，已被成功应用于多种人类病毒感染研究。前期研究表明，树鼩对B95-8细胞产生的T1 EBV易感，能够在无明显临床症状的情况下建立持续性感染，这为EBV研究提供了新的动物模型。

在此背景下，罗振秋等研究人员在《Virology Journal》上发表了最新研究成果，首次利用树鼩模型系统比较了T1和T2 EBV的感染特性。研究团队通过静脉接种方式，将18只树鼩随机分为三组，分别接种T1 EBV（B95-8细胞系来源）、T2 EBV（P3HR-1细胞系来源）和空白对照，在感染后多个时间点检测病毒载量和宿主转录组变化，旨在揭示不同EBV亚型在体内的感染动态和宿主应答差异。

本研究采用的主要技术方法包括：从EBV生产细胞系B95-8（T1）和P3HR-1（T2）上清液中纯化病毒颗粒；通过实时定量PCR（qPCR）检测外周血单个核细胞（PBMCs）、血浆和组织中的EBV-DNA载量；利用免疫组织化学（IHC）检测潜伏膜蛋白1（LMP1）表达；通过EBER原位杂交（ISH）鉴定病毒潜伏感染；对树鼩PBMCs进行RNA测序（RNA-seq）分析转录组变化，包括差异表达基因（DEGs）和KEGG通路富集分析。实验动物来自广西医科大学实验动物中心，所有操作均遵循动物伦理规范。

检测EBV-DNA在感染T1或T2 EBV树鼩中的载量

研究结果显示，在T1 EBV感染组中，接种后第3天所有6只树鼩的PBMCs中均可检测到EBV-DNA，平均载量为1×10^4.03 copies/mg DNA，最高载量达到1×10^4.34 copies/mg。随后病毒载量逐渐下降，第7天平均为1×10^2.91 copies/mg，第14天时6只动物中仍有4只检测阳性，到第28天时仅剩1只保持阳性，载量为1×10^2.60 copies/mg。相比之下，T2 EBV组中仅有1只动物在第3天呈现低水平病毒DNA（1×10^2.31 copies/mg），之后未再检测到阳性。血浆样本呈现相似趋势。组织检测发现，T1组树鼩的脾脏和淋巴结中均检测到EBV-DNA，平均载量分别为1×10^3.96 copies/g和1×10^2.66 copies/g，而T2组所有组织检测均为阴性。

树鼩组织中EBV感染的组织病理学检测

通过免疫组织化学和原位杂交技术，在T1 EBV感染树鼩的脾脏和淋巴结中检测到LMP1蛋白和EBERs阳性细胞，这些细胞主要位于滤泡边缘区，生发中心较少见。EBERs阳性信号仅在具有持续性病毒血症的T1组树鼩中观察到。T2 EBV组的所有残留组织以及空白对照组的所有组织中均未检测到EBERs阳性细胞或EBV相关基因/蛋白的表达。

不同EBV型别在树鼩中的转录组特征

无监督层次聚类分析显示，T2 EBV感染动物与对照组数据聚集，而T1 EBV感染树鼩形成独立分支，表明感染持续时间和病毒亚型显著影响宿主转录谱。T1 EBV组在感染期间（7和28 dpi）的重叠差异表达基因（DEGs）达214个，远高于T2组的17个，提示T1 EBV对宿主基因表达具有更广泛显著的调控作用。在7 dpi时，仅16个DEGs为两种亚型所共有，凸显其感染动态的差异性。

差异表达分析发现，T2 EBV组在7 dpi时鉴定出168个DEGs（73个上调和95个下调），28 dpi时为133个DEGs（86个上调和47个下调）。相比之下，T1 EBV感染在7 dpi时引起442个DEGs（359个上调和83个下调），28 dpi时为356个DEGs（294个上调和62个下调）。这表明T1 EBV主要诱导基因上调，而T2 EBV感染表现出更多的基因下调。KEGG通路富集分析进一步证实了这些差异：T1 EBV感染动物的DEGs显著富集于炎症相关通路，包括TNF、Toll样受体和NF-κB信号通路；而T2 EBV组在28 dpi时无通路达到统计学显著性，仅在7 dpi时富集于有限数量的调控相关通路。

研究结论表明，T1 EBV在树鼩模型中表现出更强的感染能力和持续性感染特征。其在外周血和淋巴器官中可检测到较高的病毒DNA载量，并能建立持久感染。相反，T2 EBV感染效率较低，病毒载量迅速降至检测限以下，无法建立持续性感染，诱导的宿主基因表达变化也相对有限。这些发现为理解EBV亚型特异性感染差异提供了重要的体内实验证据。

讨论部分深入分析了造成这种差异的潜在机制。树鼩补体受体2（CR2）与人类同源物在关键残基上具有100%的同一性，远高于兔模型的50%，这可能是树鼩模型优于兔模型的重要原因。值得注意的是，NR4A1基因在T1 EBV感染中上调（log₂FoldChange=1.9，padj<0.01），该基因是导致T细胞功能障碍的关键调控因子，其上调可能通过促进T细胞凋亡来帮助病毒感染细胞逃避免疫监视，从而维持潜伏感染。而在T2 EBV感染中，由于缺乏EBNA2，可能导致更强的T细胞介导的细胞毒性和增强的促凋亡活性，这可能是T2 EBV难以建立持续性感染的重要原因。

该研究的局限性包括使用的P3HR-1 EBV缺乏EBNA2基因，可能不能完全代表所有T2 EBV；样本量相对有限；缺乏树鼩特异性血清学试剂；以及需要进一步的体外实验验证感染机制。未来研究需要纳入更多的T2 EBV细胞系（如AG876）来严格验证这些发现，并提供更全面的T1-T2 EBV差异理解。

总之，这项研究首次将树鼩模型应用于T1和T2 EBV的比较分析，为EBV亚型特异性感染研究提供了新的技术平台，对深入理解EBV致病机制和开发针对性防治策略具有重要意义。研究结果不仅证实了树鼩作为EBV感染模型的适用性，还为解析不同EBV亚型在体内的生物学行为差异提供了重要线索。